GPMV M基因的克隆及其主要抗原位點(diǎn)的原核表達(dá).pdf

1、鵝副粘病毒(GPMV)為副粘病毒科，副粘病毒亞科，腮腺炎病毒屬禽副粘病毒Ⅰ型(APMV-1)中的成員，引起鵝副粘病毒病。該病自1997年由揚(yáng)州大學(xué)王永坤教授報(bào)道以來，在國內(nèi)很多地區(qū)流行。鵝副粘病毒病是以消化道病變?yōu)橹饕卣鞯木哂懈叨劝l(fā)病率和死亡率的烈性傳染病，給這些地區(qū)的養(yǎng)鵝業(yè)造成了巨大的經(jīng)濟(jì)損失。初步試驗(yàn)表明，GPMV與傳統(tǒng)的NDV的致病性不同，并且常規(guī)的NDV疫苗不能提供有效的保護(hù)。因此從分子生物學(xué)水平上對(duì)該病進(jìn)行研究具有重要的意義

2、?！　”狙芯扛鶕?jù)Genbank中發(fā)表的GPMVSF02株及其它NDV全基因序列，借助Oligo4.1軟件，設(shè)計(jì)2對(duì)引物，采用RT-巢式PCR方法對(duì)鵝副粘病毒JS/1/97/Go株的M基因進(jìn)行了體外擴(kuò)增，擴(kuò)增出與預(yù)期大小相符的M基因的特異性條帶。將擴(kuò)增出的DNA片斷克隆到pMD18-T載體中，轉(zhuǎn)化TG1感受態(tài)細(xì)胞，經(jīng)AMP/IPTG/X-gal平板篩選，酶切和PCR鑒定后獲得陽性重組質(zhì)粒。序列測(cè)定表明：M基因全長(zhǎng)1095bp，含有一個(gè)完

3、整的開放閱讀框架，編碼365個(gè)氨基酸殘基，與參考序列比較，核苷酸的同源性為84.8％～98.9％?！　⊙芯抠Y料表明GPMVM基因5'端長(zhǎng)444bp的特異片斷主要決定其活性，據(jù)此又設(shè)計(jì)合成一對(duì)引物，克隆M基因5'端1bp-444bp，命名為M基因主要抗原位點(diǎn)片斷(M1)?！　基因主要抗原位點(diǎn)片斷(M1)同載體PGEX-6P-1連接后，轉(zhuǎn)化入E.Coli.BL21(DE3)PlysS，經(jīng)IPTG誘導(dǎo)表達(dá)出目標(biāo)蛋白，與預(yù)計(jì)相符。對(duì)表達(dá)