人類neuritin在原核細(xì)胞中的克隆、表達(dá)及相關(guān)生物學(xué)功能的研究

1、分類號(hào)石河子大學(xué)碩士學(xué)位論文人類Neuritin在原核細(xì)胞中的克隆、表達(dá)及相關(guān)生物學(xué)功能的研究研究生指導(dǎo)教師申請(qǐng)學(xué)位門類級(jí)別學(xué)科、專業(yè)名稱研究方向所在學(xué)院唐娟吳亮生教授醫(yī)學(xué)碩士人體解剖與組織胚胎學(xué)神經(jīng)再生醫(yī)學(xué)院中國新疆石河子2006年6月人類Neuritin在原核細(xì)胞中的克隆、表達(dá)及相關(guān)生物學(xué)功能的研究人類Neuritin在原核細(xì)胞中的克隆、表達(dá)及相關(guān)生物學(xué)功能的研究研究生：唐娟(人體解剖與組織胚胎學(xué))導(dǎo)師：吳亮生教授摘要神經(jīng)營養(yǎng)因子是

2、～類促進(jìn)神經(jīng)細(xì)胞存活、生長(zhǎng)、分化的多肽分子，在神經(jīng)系統(tǒng)發(fā)育、分化和損傷修復(fù)過程中起著非常重要的作用。Neuritin是一種新近發(fā)現(xiàn)的與神經(jīng)可塑性相關(guān)的神經(jīng)營養(yǎng)因子。研究表明Neuritin在神經(jīng)再生的領(lǐng)域中具有較廣泛的生物學(xué)活性，可促進(jìn)神經(jīng)突起的快速生長(zhǎng)和分支，并參與調(diào)節(jié)神經(jīng)元突觸活動(dòng)，因而對(duì)多種因素引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷后軸突和突起的生長(zhǎng)具有潛在的治療與預(yù)防作用。由于Neuritin體內(nèi)含量低，提取與純化困難，難以滿足研究和臨床治療需要，

3、因此以基因工程的方法制備重組人的Neuritin將是獲IRNeuritin有效的手段。本論文就Neuritin在原核表達(dá)、純化及生物學(xué)活性測(cè)定等進(jìn)行了研究，這為臨床上用基因治療神經(jīng)系統(tǒng)疾病奠定了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。本實(shí)驗(yàn)是以neuritineDNA為模板，PCR擴(kuò)增neuritin基因后，克隆于原核表達(dá)載體pET32a，分別用NocI和NotI雙酶切鑒定。鑒定正確的重組子pET32一neuritin轉(zhuǎn)化大腸桿菌BL2l，測(cè)序正確的陽性轉(zhuǎn)化子用IP

4、TG誘導(dǎo)后獲得了融合Neuritin蛋白；SDSPAGE分析表明：大腸桿菌表達(dá)菌株經(jīng)IPTG誘導(dǎo)后，可表達(dá)分子量為30kD的融合Neuritin蛋白質(zhì)并且在4小時(shí)時(shí)表達(dá)量最大；Westernblot檢測(cè)表明該表達(dá)產(chǎn)物具有Neuritin免疫活性；經(jīng)NiNrA純化系統(tǒng)及尿素分步透析，表達(dá)蛋白得到了有效的純化和復(fù)性。最后，對(duì)重組Neuritin的活性進(jìn)行鑒定。結(jié)果表明：與陰性和空白組對(duì)照后，大腸桿菌表達(dá)的融合的Neuritin在體外能促進(jìn)培