葡萄土壤桿菌E26菌株細(xì)菌素產(chǎn)生相關(guān)基因的初步研究.pdf

1、無致病性的葡萄土壤桿菌AgrobacteriumvitisE26菌株是防治葡萄根癌病中很有應(yīng)用前景的生防菌株，細(xì)菌素的產(chǎn)生是該菌株生防機(jī)制中的重要因素。本研究采用轉(zhuǎn)座子誘變技術(shù)對E26菌株進(jìn)行誘變，共獲得15,000株有mini-Tn5插入的接合子，通過平皿抑菌檢測這些接合子對葡萄根癌病致病菌AgrobacteriumvitisK308的抑制作用即其細(xì)菌素產(chǎn)生情況，共獲得31株產(chǎn)素突變株，其中29株產(chǎn)素能力不同程度減弱，分別命名為A1-

2、A29，2株產(chǎn)素能力完全喪失，命名為B1和B2。產(chǎn)素突變株產(chǎn)素能力改變程度的不一致表明了E26菌株細(xì)菌素的合成涉及到多個(gè)基因。將31個(gè)突變株分別與致病菌K308混合接種指示植物向日葵，結(jié)果顯示，與野生型E26菌株相比，產(chǎn)素能力喪失的2個(gè)突變株B1和B2的生防能力都有所下降，29個(gè)產(chǎn)素能力減弱的突變株中有13個(gè)突變株的生防能力有所下降，E26菌株產(chǎn)素能力的下降與生防能力的下降之間存在極顯著的正相關(guān)。提取31個(gè)突變株的總DNA和質(zhì)粒DNA，

3、將其質(zhì)粒與野生型E26菌株的質(zhì)粒進(jìn)行比較后，以mini-Tn5片段為探針，進(jìn)行斑點(diǎn)雜交，結(jié)果顯示，31個(gè)產(chǎn)素突變株的質(zhì)粒都未發(fā)生轉(zhuǎn)移或丟失，2個(gè)產(chǎn)素能力喪失的突變株和6個(gè)產(chǎn)素能力減弱的突變株其突變基因位于質(zhì)粒上，另外23個(gè)產(chǎn)素能力減弱的突變株其突變基因位于染色體上，由此可推導(dǎo)出土壤桿菌E26菌株產(chǎn)素性狀與質(zhì)粒和染色體都相關(guān)。本研究還選取了突變株A5、A25和B1進(jìn)行了轉(zhuǎn)座子側(cè)翼序列的克隆，序列比較表明A5的側(cè)翼序列與Sinorhizob