小鼠角膜創(chuàng)傷修復(fù)的分子機(jī)制.pdf

1、目的：創(chuàng)建小鼠角膜創(chuàng)傷修復(fù)的動物模型；研究小鼠角膜創(chuàng)傷修復(fù)過程中基因表達(dá)譜的變遷；觀察細(xì)胞增殖和纖維化調(diào)節(jié)因子在創(chuàng)傷修復(fù)早期的動態(tài)變化。 方法： 1.創(chuàng)建動物模型 以三種創(chuàng)傷方式制作小鼠角膜穿通傷動物模型，臨床評分確定重復(fù)性高，再現(xiàn)性好的動物模型。行HE染色和免疫組化評價(jià)角膜創(chuàng)傷修復(fù)的過程。 2.應(yīng)用基因表達(dá)芯片研究小鼠角膜創(chuàng)傷修復(fù)過程中基因表達(dá)譜的變遷 收集傷后3d和14d的小鼠角膜，分別與正常

2、角膜進(jìn)行芯片雜交。讀取數(shù)據(jù)后，分析差異表達(dá)基因的表達(dá)譜和特點(diǎn)。 3.觀察細(xì)胞增殖和纖維化調(diào)節(jié)因子在小鼠角膜創(chuàng)傷修復(fù)早期的動態(tài)變化 收集正常時(shí)及傷后6h，24h，72h的小鼠角膜，行RT-PCR，觀察TGF-β2、CTGF、G0/G1開關(guān)基因2的變化，該實(shí)驗(yàn)同時(shí)是對基因芯片數(shù)據(jù)的驗(yàn)證。 結(jié)果： 1.三種創(chuàng)傷方式中三棱針角膜中央穿刺是重復(fù)性和再現(xiàn)性最好。 2.角膜創(chuàng)傷后3d和15d差異性表達(dá)基因共29

3、7個(gè)，以下調(diào)基因?yàn)橹?。?xì)胞骨架/細(xì)胞外基質(zhì)是主要的差異性表達(dá)基因類別之一，肌球蛋白、絲氨酸(或半胱氨酸)蛋白酶抑制劑、視黃醇結(jié)合蛋白4等基因下調(diào)10倍以上。 3.TGF-β2、CTGF、G0/G1開關(guān)基因2在傷后24h一過性增高，之后下調(diào)。 結(jié)論： 1.三棱針角膜中央穿刺法可成功制作角膜創(chuàng)傷修復(fù)的動物模型。 2.基因芯片實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示，小鼠角膜創(chuàng)傷修復(fù)調(diào)控因子的研究方向是大量未知功能或未被涉及的基因。