草麻黃體外培養(yǎng)及抗旱基因轉化.pdf

1、草麻黃作為傳統(tǒng)中藥市場需求量很大，但是干旱和鹽堿嚴重制約草麻黃的產量，抗旱耐鹽堿草麻黃的研制將對中草藥草麻黃開發(fā)有現(xiàn)實經濟意義。本研究以草麻黃為試材研究了草麻黃不同外植體、激素配比、基本培養(yǎng)基、pH值、子葉放置方式等對草麻黃愈傷組織誘導和植株再生的影響，利用基因槍轉化將抗旱基因lea3導入麻黃愈傷組織細胞中，愈傷組織植株再生獲得含抗旱基因lea3再生植株。 草麻黃愈傷組織誘導研究表明，不同外植體來源對愈傷組織誘導結果不同，子葉和

2、胚軸外植體來源對愈傷組織誘導效果明顯好于胚根來源對愈傷組織誘導效果，三種外植體來源的愈傷組織誘導率分別為65.2％、57.4％和1.2％。培養(yǎng)基組成和激素配比也直接影響愈傷組織生成，最終確定草麻黃愈傷組織最佳誘導條件為MS+2,4-D1.5mg/L+6-BA1.0mg/L+蔗糖30mgg/L。在草麻黃愈傷組織懸浮培養(yǎng)中發(fā)現(xiàn)，MS+2,4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+CH250mg/L+YE250mg/L+30g/L蔗糖+5

3、g/L葡萄糖，為細胞懸浮最佳培養(yǎng)基。通過對草麻黃愈傷組織生長規(guī)律研究發(fā)現(xiàn)，愈傷組織最佳培養(yǎng)基成分為N6+2,4-D2.0mg/L+6-BA1.0mg/L+30g/L蔗糖，生長旺盛期是在繼代培養(yǎng)后第24-28d，對愈傷組織生長過程中的POD和PPO兩種酶活測定也說明了這一點。草麻黃愈傷組織再生培養(yǎng)中研究了培養(yǎng)基組成、激素、pH值等因素對愈傷組織再生植株的影響，得到適于草麻黃愈傷組織分化的培養(yǎng)基MS+NAA0.2mg/L+KT0.5mg/L

4、+蔗糖30mg/L，pH5.8-6.0，麻黃愈傷組織再生率為15％。 在建立麻黃愈傷組織誘導和再生體系基礎上，利用基因槍法將帶有抗旱耐鹽堿基因lea3的PBY520質粒導入麻黃組織細胞中，經過除草劑Bialaphos3次篩選得到具除草劑Bialaphos抗性愈傷組織，Bialsphos抗性愈傷組織得率為12.83％；將Bialsphos抗性愈傷組織置于分化培養(yǎng)基上培養(yǎng)4周，得到除草劑抗性再生植株7株，再生率為12.5％。通過對試