多肽：N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶結(jié)構(gòu)類似基因(ppGalNAc-T18)的研究.pdf

1、多肽：N-乙酰氨基半乳糖轉(zhuǎn)移酶（ppGalNAc-T）能將N-乙酰氨基半乳糖（GalNAc）結(jié)合到蛋白質(zhì)肽鏈的Ser 或Thr 上，是催化蛋白質(zhì)O-糖基化修飾的起始糖基轉(zhuǎn)移酶。人體中的ppGalNAc-T為一家族酶，迄今為止，己有16個成員被研究報道，它們在人體組織中的分布和體外多肽糖基化修飾的底物專一性都存在著差異。ppGalNAc-T 可以作為腫瘤標(biāo)志物，如ppGalNAc-T6 是乳腺癌的標(biāo)志分子，ppGalNAc-T13 是成神

2、經(jīng)細(xì)胞瘤的標(biāo)志基因。最新研究發(fā)現(xiàn)ppGalNAc-T14 調(diào)控死亡受體Apo2L/TRAIL的糖基化修飾，ppGalNAc-T14的過表達(dá)能顯著促進(jìn)細(xì)胞的凋亡。 通過Blast 搜索，在我們前期研究中發(fā)現(xiàn)一個與ppGalNAc-T8 相似的EST序列，克隆出其ORF，命名為ppGalNAc-T18。ppGalNAc-T18蛋白為Ⅱ型膜蛋白，氨基酸序列包含ppGalNAc-T家族的所有基序（Motif）。 對ppGalNA

3、c-T家族的進(jìn)化樹分析發(fā)現(xiàn)，ppGalNAc-T18 與ppGalNAc-T17、T8、T9 這四個基因形成一個亞類，我們將其命名為Y家族。與其他ppGalNAc-T 相比，Y家族的氨基酸序列在DXH motif和Gal/GalNAc-Tmotif中有好幾處顯著的突變。 體外酶活實驗表明ppGalNAc-T18 沒有對合成多肽的底物催化活性。 我們發(fā)現(xiàn)以ppGalNAc-T1為代表的W家族的3 處能結(jié)合供體UDP-Gal

4、NAc的氨基酸（H125，C212，C214）在ppGalNAc-T18中都發(fā)生了氨基酸突變，我們推測ppGalNAc-T18 喪失了對UDP-GalNAc的結(jié)合能力。 為進(jìn)一步研究ppGalNAc-T18的功能，本研究設(shè)計了ppGalNAc-T18抗原，成功制備得到了ppGalNAc-T18 多克隆抗體。該抗體具有極高的特異性，其與其他ppGalNAc-T 不發(fā)生交叉反應(yīng)。ppGalNAc-T18 抗體的獲得為研究其生物學(xué)功能提