JAK-STAT信號通路阻斷劑AG490聯(lián)合DDP對子宮頸癌裸鼠移植瘤生長的影響.pdf

1、目的：通過體內(nèi)試驗觀察JAK/STAT通路阻斷劑AG490聯(lián)合化療藥物DDP對子宮頸癌裸鼠移植瘤生長的影響，探討AG490通過阻斷STAT3通路對人子宮頸癌裸鼠移植瘤生長抑制作用及與Caspase-3蛋白表達的關(guān)系。以期對臨床上藥物治療與預(yù)防子宮頸癌尋找更加完善的途徑。 方法：建立人子宮頸癌(Hela)細胞裸鼠異種移植瘤模型并分組。AG490單用或聯(lián)合DDP處理各組裸鼠。用藥期間測量裸鼠體重和腫瘤體積，檢測瘤重計算抑瘤率。流式細

2、胞分析術(shù)測腫瘤組織中細胞凋亡情況，免疫組化檢測移植瘤組織中P-stat3和Caspase-3蛋白表達。所有數(shù)據(jù)均采用SPSS10.0統(tǒng)計軟件進行處理。 結(jié)果： 1、藥物對裸鼠移植瘤體積生長的影響：分別在用藥后第1天、第4天、第7天及第10天測量腫瘤長徑(a)、短徑(b)，計算體積，描繪移植瘤生長曲線圖。結(jié)果可見從用藥第7天開始DDP組、AG490組以及聯(lián)合用藥組(DDP+AG490組)腫瘤體積均小于對照組，有顯著性差異(

3、P<0.001)。聯(lián)合用藥組與DDP組、AG490組比抑瘤作用顯著增強(P<0.05、P<0.001)。DDP組對腫瘤的生長抑制與AG490組相比顯著增強(P<0.05)。 2、藥物對移植瘤裸鼠體重及副作用的影響：藥物治療子宮頸癌裸鼠移植瘤生長期間，從用藥第7天開始，順鉑組和聯(lián)合用藥組與對照組比差異有統(tǒng)計學意義(P<0.001)。AG490組與對照組比差異無統(tǒng)計學意義(P>0.05)且裸鼠一般情況良好，進食和體重無明顯變化。DD

4、P組于治療開始后第7天裸鼠逐漸出現(xiàn)嚴重消瘦，營養(yǎng)不良，并且出現(xiàn)明顯食欲減退，活動遲緩，皮膚無光澤等毒副反應(yīng)，體重變化與聯(lián)合用藥組間存在明顯差異(P<0.05)，該組有1只裸鼠死亡。 3、各組裸鼠移植瘤瘤重的變化：處死裸鼠，剝出瘤塊用電子天平稱量瘤重(W)，計算抑瘤率。抑瘤率分別為對照組0％、順鉑組51.2％、AG490組33.6％、聯(lián)合用藥組59.2％與對照組相比，各藥物作用組均對裸鼠移植瘤有抑制作用，差異有顯著性意義(P<0.

5、05)。AG490與DDP聯(lián)合應(yīng)用比兩者單獨應(yīng)用抑瘤作用更明顯，差異有顯著性意義(P<0.05)。DDP組比AG490組抑瘤作用強，差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 4、流式細胞儀分析凋亡率：DDP組、AG490組和聯(lián)合用藥組有明顯G1期形成的凋亡峰，三個用藥組的凋亡率分別是52.1±1.3％、39.5±0.4％、66.7±1.8％。與對照組10.2±2.4％相比均有顯著性差異(P<0.05)。流式細胞分析的各組DNA組方圖，

6、可見各用藥組有明顯的G1期形成的凋亡峰。 5、光學顯微鏡下觀察Hela細胞裸鼠移植瘤組織形態(tài)學的改變：肉眼觀移植瘤呈結(jié)節(jié)狀，腫瘤組織血供豐富，無明顯周圍組織和皮膚浸潤，界限清楚，易分離，切面呈魚肉樣。光鏡下觀察腫瘤細胞呈巢、片、條索狀排列，瘤細胞體大、核大深染，核仁明顯，病理性核分裂相易見，瘤周組織內(nèi)血管擴張充血，并有少量淋巴細胞、中性粒細胞浸潤，瘤巢之間有少量的纖維及血管。瘤組織內(nèi)見小灶性凝固性壞死。用藥后，腫瘤組織出現(xiàn)不同程

7、度的壞死。腫瘤細胞平均壞死率為：對照組21.8±9.0％、A6490組39.4±11.3％、DDP組40.8±7.3％、聯(lián)合用藥組61.9±9.6％，各組與對照組差異有統(tǒng)計學顯著意義(P<0.05)，聯(lián)合用藥組與AG490組、DDP組差異有統(tǒng)計學意義(P<0.05)。 6、免疫組化結(jié)果：P-stat3的陽性表達主要位于宮頸癌細胞的胞漿內(nèi)，染色較深，散在分布，Caspase-3的陽性表達亦位于胞漿內(nèi)，散在或灶性分布。各組陽性率依次

8、為：P-STAT3對照組92.5％；DDP組64％；AG490組55％；聯(lián)合用藥組40.9％；Caspase-3對照組30.4％；DDP組60％；AC490組55.6％；聯(lián)合用藥組92.3％；在AG490組中，P-stat3蛋白與Caspase-3蛋白的表達無負相關(guān)性(r=-0.074，P>0.05) 結(jié)論： 1、AG490能抑制人宮頸癌Hela細胞裸鼠移植瘤的生長，還可以增加順鉑對宮頸癌的藥物敏感性，降低順鉑化療的毒副