生長抑素及其受體對人非小細胞肺癌靶向治療的實驗研究.pdf

1、肺癌是最常見的惡性腫瘤之一，非小細胞肺癌(non．small cell lung cancer，NSCLC)約占全部肺癌的80﹪，許多患者確診時就失去手術(shù)機會。靶向治療是當前肺癌研究的熱點。目前，多肽類受體作為惡性腫瘤診斷和治療的分子靶點已成為研究的熱點，生長抑素受體(somatostatin receptor，SSTR)是其中的典型代表。SSTR在人非小細胞肺癌的表達明顯高于正常組織。非小細胞肺癌病人SSTR放射顯像陽性率很高(75～

2、100﹪)，這為非小細胞肺癌病人SSTR靶向治療提供了可能。 紫杉醇(paclitaxel，PTX)具有廣泛的抗腫瘤活性，目前已成為包括非小細胞肺癌在內(nèi)的多種腫瘤的一線化療藥物。然而同其他化療藥物一樣，紫杉醇對人體具有許多的不良反應，其中包括骨髓抑制、神經(jīng)毒性等。奧曲肽是生長抑素的八肽類似物，與SSTR2、3、5具有較強的結(jié)合力。將紫杉醇與生長抑素類似物奧曲肽連接，通過奧曲肽與腫瘤細胞表面SSTR的結(jié)合，在對腫瘤起到靶向治療作用

3、的同時，也可以減輕對人體的毒副作用。固相有機化學的發(fā)展，使紫杉醇與奧曲肽的耦連變成現(xiàn)實。最近我們合成了一系列的紫杉醇一奧曲肽耦連藥物，其對人非小細胞肺癌的靶向治療作用需要實驗證實。 SSTR．亞型的表達受到多種因素的影響，包括糖皮質(zhì)激素、雌激素、甲狀腺素、胰島素、睪丸酮等。研究表明，SSTR的表達與孕激素受體(progesteronereceptor，：PR)的表達正相關(guān)，孕激素可能有上調(diào)SSTR的作用。 孕激素與PR結(jié)

4、合后，可以通過多種途徑抑制細胞生長。生長抑素也可以通過直接作用和間接作用產(chǎn)生抗腫瘤作用。研究孕激素對SSTR表達的調(diào)節(jié)作用，以及生長抑素聯(lián)合孕激素對人非小細胞肺癌的治療作用，將會在非小細胞肺癌的生物學治療中起到重要的作用。 目的：評價紫杉醇.奧曲肽耦連物對人非小細胞肺癌細胞株A549和Calu-6細胞的毒性和靶向性；探討孕激素調(diào)節(jié)SSTR在人非小細胞肺癌中的表達，以及聯(lián)合應用孕激素與生長抑素對人非小細胞肺癌的治療作用。探索生長抑

5、素及其受體在人非小細胞肺癌靶向治療中的作用。 方法：RT-PCR法檢測A549和Calu-6細胞中SSTR的表達，檢測人成纖維細胞SSTR的表達；以人成纖維細胞作為陰性對照細胞株，MTT-法檢測紫杉醇.奧曲肽耦連藥物對A549和Calu-6細胞及人成纖維細胞的毒性；流式細胞儀檢測耦連藥物作用后A549細胞的細胞周期變化；免疫組化法檢測A549細胞中PR的表達；RT-PCR檢測孕激素作用后A549細胞中SSTR亞型mRNA的表達；

6、MTT法檢測孕酮與奧曲肽聯(lián)合應用后A549細胞的生存率。 結(jié)果：人非小細胞肺癌細胞A549和Calu-6均表達SSTR0、SSTR2、SSTR4和SSTR5；其中A549細胞高表達SSTR2；Calu-6細胞高表達SSTR5。人成纖維細胞不表達SSTR。 紫杉醇-奧曲肽耦連藥物對A549和Calu-6細胞的毒性作用具有濃度依賴性和時間依賴性，耦連藥物細胞毒性同紫杉醇相似，沒有統(tǒng)計學差異。10倍濃度奧曲肽降低耦連藥物對A5

7、49細胞的細胞毒性，增強紫杉醇對A549細胞的毒性作用。 紫杉醇-奧曲肽耦連藥物對人成纖維細胞的細胞毒性較紫杉醇弱，具有統(tǒng)計學差異。1 μmol/L紫杉醇、PTX-OCT、2PTX-OCT作用24 h后，人成纖維細胞細胞生存率分別為64.7±8.6﹪、86.1±1.8﹪和90±5.6﹪。 流式細胞儀分析藥物作用后.A549細胞的細胞周期，1 μmol/L紫杉醇、PTX-OCT和2PTX-OCT作用24 h后，A549細胞

8、G<,2>/M期的比率分別為44.9﹪、55.8﹪、75.4﹪，對照組中G<,2>/M期的比率為13.4﹪。 A549細胞表達PR；孕酮上調(diào)SSTR亞型在A549細胞中的表達。這種調(diào)節(jié)作用具有亞型特異性，與藥物作用時間及藥物濃度相關(guān)。0.1 mol/L孕酮處理A549細胞24 h，SSTR各亞型的表達普遍上調(diào)(p<0.05)，未發(fā)現(xiàn)SSTR3的表達；增加孕酮濃度為10 nmol/L，SSTR5表達繼續(xù)上調(diào)(p=0.001)，且出

9、現(xiàn)SSTR3的表達；繼續(xù)增加藥物濃度至1 μmol/L，SSTR各亞型表達變化不明顯。延長10nmol/L孕酮作用時間至48 h，SSTR3、SSTR5的表達繼續(xù)上調(diào)(p=0.012，p=0.02)；其他SSTR亞型的表達均有上調(diào)趨勢。單藥孕酮和奧曲肽均可抑制A549細胞的生長；聯(lián)合應用孕酮與奧曲肽，A549細胞的生存率進一步下降。析因分析表明，聯(lián)合用藥后孕酮與奧曲肽之間存在著交互作用(p=0.015)，聯(lián)合應用孕酮和奧曲肽比單用兩藥對

10、A549細胞的抑制作用更強(p<0.05)。 結(jié)論： 1.人非小細胞肺癌細胞A549和Calu-6表達SSTR亞型mRNA。 2.紫杉醇.奧曲肽耦連物對于表達SSTR的腫瘤細胞具有與紫杉醇相似的抗腫瘤活性；對SSTR低表達或不表達的細胞具有更弱的毒性。紫杉醇一奧曲肽有希望作為一種新的靶向藥物來治療非小細胞肺癌。 3.孕酮上調(diào)A549細胞中SSTR各亞型mRNA的表達。 4.孕酮聯(lián)合奧曲肽對A549