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文檔簡介
1、背景:骨髓衰竭綜合征(Bone marrow failure syndrome)包括一組疾病,可以是先天的或獲得的。先天性骨髓衰竭綜合征包括Fanconi貧血、先天性角化不良(DKC)、Shwachman-Diamond綜合征等。最常見的獲得性骨髓衰竭綜合征是再生障礙性貧血、陣發(fā)性睡眠血紅蛋白尿癥(PNH)和骨髓增生異常綜合征(MDS)。以獲得性再生障礙貧血(以下簡稱再障)為例,東方人群該病的發(fā)病率是西方的2到3倍。造成這種東西方發(fā)病率
2、差異的原因目前還不明確,推測可能與種族間的再障相關(guān)基因背景不同有關(guān)。關(guān)于骨髓衰竭綜合征可能與端粒酶缺陷有關(guān)的想法,最早始于對先天性角化不良(Dyskeratosis Congenita,DKC)的研究。在部分常染色體顯性遺傳的DKC患者中,發(fā)現(xiàn)端粒酶RNA模版TERC基因3'端存在缺失突變,提示這些病人骨髓衰竭的原因可能與端粒酶基因缺陷有關(guān)。進(jìn)而在部分獲得性再障的病人中也發(fā)現(xiàn)了TERC基因突變,但是這部分患者并沒有典型的DKC的皮膚表現(xiàn)
3、。以此為出發(fā)點,近幾年國外學(xué)者在獲得性再障、MDS以及PNH患者中對端粒酶復(fù)合體基因突變做了相關(guān)的篩查,發(fā)現(xiàn)獲得性再障患者中的一小部分存在端粒酶復(fù)合體基因的突變,包括TERC(telomerase RNA component)和TERT(telomerase reversetranscriptase)基因突變。但是亞洲人群中,目前只有日本在96例兒童再障患者中篩查了上述兩個基因突變。為了進(jìn)一步研究亞洲人群骨髓衰竭高發(fā)是否與端粒酶基因突變
4、有關(guān),本研究收集了中國北方獲得性骨髓衰竭綜合征患者90例(包括獲得性再障、MDS和PNH),對端粒酶基因突變進(jìn)行了篩查。并用Southern雜交和流式一原位雜交兩種方法測定了患者端粒長度,研究端粒酶基因突變對端粒長度造成的影響,以及骨髓衰竭患者不同白細(xì)胞亞群間端??s短的差異。研究的意義在于,通過這種篩查,可以使我們發(fā)現(xiàn)一些臨床表現(xiàn)與獲得性骨髓衰竭難以區(qū)分的病人,他們治療上宜早期進(jìn)行骨髓移植而非免疫抑制。 目的:1.研究中國北方人
5、群骨髓衰竭綜合征患者端粒酶復(fù)合體基因突變發(fā)生的頻率,以及突變與端粒長短的關(guān)系。 2.Southern blot方法測量患者端粒長度,研究端粒酶基因突變與端粒長度變化間的關(guān)系。 3.建立流式雜交方法檢測不同有核細(xì)胞端粒長度的變化。 方法: 1.收集北京協(xié)和醫(yī)院、河北廊坊市中醫(yī)院、北京市朝陽醫(yī)院,以及北京市東直門醫(yī)院部分診斷明確的骨髓衰竭綜合征患者90人(包括再生障礙性貧血、骨髓增生異常綜合征、陣發(fā)性血紅蛋白
6、尿)。疾病診斷標(biāo)準(zhǔn)參見張之南等人主編的《血液病學(xué)》2。 2.提取患者外周血DNA。PCR方法擴增TERC基因及TERT基因第一、二外顯子,雙脫氧核酸終止法測序。 3.Southern雜交方法測定患者端粒長度。 4.流式-原位雜交方法測定外周血不同白細(xì)胞亞群端粒長度。 結(jié)果:90例患者中發(fā)現(xiàn)兩例TERC基因突變和兩例TERT突變。TERC突變:(1)n37 A→G;(2)n66G→C。TERT基因突變(1)
7、n1870G→T,造成氨基酸缺失:E/*;(2)n1780G→T,造成氨基酸替換S/I。其中一例TERT突變患者最終診斷為先天性角化不良(DKC),而非獲得性骨髓衰竭綜合征。則最終確診獲得性骨髓衰竭綜合征患者共89人,發(fā)現(xiàn)3例突變。中國北方人群中端粒酶基因突變發(fā)生率為3.4%。用Southern雜交表明,上述兩例攜帶端粒酶基因突變的病人端粒嚴(yán)重縮短,小于正常對照長度的50%。Southern雜交顯示部分無突變的骨髓衰竭患者端粒也有縮短,
8、位于正常對照長度的50-80%,與部分惡性血液病如MDS-RAEB患者的端粒長度重疊,提示惡性轉(zhuǎn)化可能。Flow-FISH也證實,部分獲得性骨髓衰竭患者外周血單個核細(xì)胞端粒長度較正常人縮短,并且單個核細(xì)胞與粒細(xì)胞端??s短程度間存在差異。 結(jié)論: 1.在中國北方人群中,獲得性骨髓衰竭綜合征患者端粒酶復(fù)合體基因突變發(fā)生率約為3.4%,與西方人群發(fā)生率相似,說明中國人群該病高發(fā)的原因與端粒酶基因關(guān)系不大。 2.Sout
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