自噬在肝癌細(xì)胞體外缺血再灌注中的意義.pdf

1、背景與目的：自噬與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展具有重要關(guān)系，并且為腫瘤治療提供了新思路，是目前國(guó)際腫瘤研究中的熱點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過(guò)肝癌細(xì)胞急性缺血/再灌注模擬研究①急性缺血/缺氧能否誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生自噬。②急性缺血/缺氧對(duì)肝癌細(xì)胞HepG2（p53野生型）
　　 和Hep3B（p53缺失型）增殖的影響并探討自吞噬及p53在其中所起的作用。③急性缺血/缺氧對(duì)肝癌細(xì)胞自噬特異性蛋白LC3及p62蛋白表達(dá)的影響。④再灌注過(guò)程中肝癌細(xì)胞自噬的變化。⑤再

2、灌注過(guò)程中p62蛋白表達(dá)的變化及其與自噬的關(guān)系。
　　 方法：通過(guò)建立缺血再灌注模型，體外培養(yǎng)HepG2和Hep3B細(xì)胞。采用吖啶橙染色熒光顯微鏡對(duì)自噬進(jìn)行定性觀察；CCK8及3MA分別檢測(cè)缺血/缺氧對(duì)細(xì)胞增殖的影響及自噬在其中的作用；
　　 RT-PCR檢測(cè)缺血/缺氧后自噬特異性基因LC3表達(dá)的變化；于再灌注不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)模擬液中LDH值；westerblot檢測(cè)自噬特異性蛋白LC3及p62在缺血再灌注不同時(shí)間點(diǎn)的表達(dá)

3、。
　　 結(jié)果：①急性缺血/缺氧可誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生自噬，LC3在基因及蛋白水平均有改變（ P<0.05）。②急性缺血/缺氧可促進(jìn)肝癌細(xì)胞生長(zhǎng)，加入自噬抑制劑后增殖率明顯下降（PHepG2＝0.033，PHep3B＝
　　 0.042）。③HepG2和Hep3B在急性缺氧誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞增殖上無(wú)差別（P>0.05），加入自噬抑制劑抑制自噬后兩者的細(xì)胞增殖率比較具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P=0.016）④急性缺血/缺氧可下調(diào)p62蛋白的表

4、達(dá)，兩種肝癌細(xì)胞缺血/缺氧后p62蛋白表達(dá)量缺血/缺氧組與正常培養(yǎng)組均存在顯著性差異（PHepG2＝0.001;PHep3B=0.008）。⑤p62蛋白在缺氧時(shí)表達(dá)量下降復(fù)氧再灌注過(guò)程中短時(shí)間內(nèi)迅速上升。
　　 結(jié)論：①急性缺血/缺氧可迅速誘導(dǎo)肝癌細(xì)胞產(chǎn)生自噬，自噬特異性蛋白LC3在基因及蛋白水平均有改變。②自噬在急性缺氧促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖過(guò)程中起到重要作用③急性缺血/缺氧過(guò)程中p53可通過(guò)不依賴于自噬的其他方式促進(jìn)肝癌細(xì)胞增殖，