褪黑素對(duì)SD大鼠腦缺血再灌注誘發(fā)的自噬的影響.pdf

1、目的:研究SD大鼠腦缺血再灌注一周內(nèi)皮層和海馬自噬的活性變化,以及褪黑素處理后對(duì)自噬的影響。
　　方法:(1)實(shí)驗(yàn)分組及動(dòng)物模型的制作:成年雄性SD大鼠,分為三組:假手術(shù)組,缺血再灌注組(MCAO組),褪黑素處理組。假手術(shù)組:僅模擬手術(shù),不阻塞中動(dòng)脈,一天后處死,作為對(duì)照組。MCAO組:實(shí)施左側(cè)中動(dòng)脈缺血90min之后再灌注1,3,5,7天。褪黑素處理組:實(shí)施左側(cè)中動(dòng)脈缺血90min,再灌注時(shí)腹腔注射給藥,以后每24h給藥一次。<

2、br>　　(2)樣本采集:TTC染色確定缺血部位,取相應(yīng)缺血區(qū)皮層,海馬,及相對(duì)應(yīng)右側(cè)皮層,海馬。
　　(3)Western blot檢測(cè)自噬相關(guān)蛋白LC3,Beclin1,p-p70s6k,p70s6k的表達(dá)情況。
　　結(jié)果:1)TTC染色結(jié)果顯示與假手術(shù)組相比,MCAO組皮層及皮下組織有明顯的缺血灶。
　　2)Western Blot結(jié)果:
　　(1)MCAO組,隨著再灌注時(shí)間的延長(zhǎng),皮層組織的Western

3、 blot結(jié)果顯示相對(duì)于假手術(shù)組LC3-Ⅱ的水平先上升后下降,在第一天時(shí)達(dá)到最高(p<0.05),之后的第三天,第五天略有下降,但與假手術(shù)組相比,仍有明顯的增加(第三天p<0.05,第五天p<0.01),第七天又有回升,但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p>0.05)。皮層中Beclin1的表達(dá)隨著時(shí)間延長(zhǎng)表現(xiàn)出先增后降的趨勢(shì),第一、三、五天表現(xiàn)出增長(zhǎng)的趨勢(shì),且第三天與假手術(shù)組相比有明顯的差異(P<0.05)第七天表現(xiàn)為回落,水平與假手術(shù)組相當(dāng)。海馬組織

4、中LC3-Ⅱ的水平隨時(shí)間的趨勢(shì)與皮層相吻合,但與假手術(shù)組相比,沒(méi)有明顯的差異(p>0.05),Beclin1的變化趨勢(shì)與皮層一致,表現(xiàn)為先增后降,第五天與假手術(shù)組相比有明顯的增加(P<0.05)。無(wú)論是皮層還是海馬中p70s6k的表達(dá)都呈現(xiàn)出現(xiàn)下降后上升的趨勢(shì),且與假手術(shù)組相比有明顯差異(P<0.05),p-p70s6k/p70s6k的比值整個(gè)過(guò)程均呈現(xiàn)出上升的趨勢(shì),且海馬中p-p70s6k/p70s6k與假手術(shù)組相比有明顯上升(P<0

5、.05)。
　　(2)褪黑素處理組:皮層和海馬中LC3-Ⅱ的水平第一天與假手術(shù)組幾乎沒(méi)什么分別,之后似有緩慢的增加,但與假手術(shù)組沒(méi)有明顯的差異(p>0.05),皮層中Beclin1的水平與LC3-Ⅱ的水平變化相吻合,但與假手術(shù)組相比沒(méi)有統(tǒng)計(jì)學(xué)的差異(p>0.05)。海馬中Beclin1整個(gè)過(guò)程沒(méi)有明顯的起伏,與假手術(shù)組相比沒(méi)有明顯的差異(p>0.05)。
　　結(jié)論:缺血再灌注誘導(dǎo)SD大鼠皮層和海馬組織LC3-Ⅱ、Beclin