外周血樹突狀細胞與T細胞亞群在肝移植中應用價值的臨床前期研究.pdf

1、中山大學博士后學位論文外周血樹突狀細胞與T細胞亞群在肝移植中應用價值的臨床前期研究姓名：錢世鹍申請學位級別：博士后專業(yè)：器官移植指導教師：余新炳何曉順20060101中山大學博士后研究工作報告群與正常人、肝硬化肝移植患者和肝癌肝切除患者進行比較，旨在對DCs疫苗在肝癌肝移植中潛在應用價值進行臨床前期研究?！狙芯績热荨恳桓我浦补?、受體外周血樹突狀細胞表型差異材料與方法：人外周血標本分別取自正常人、肝癌肝移植術后患者、肝硬化肝移植和肝癌肝切

2、除術后患者(n=5)，年齡20～60歲，外周血每份50mL，進行外周血單個核細胞(peripheralbloodmononuclearcells，PBMC)分離。用AIM—V無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)基將PBMC密度調到5109cells／L，加入25cm2培養(yǎng)瓶，37℃、5％C02培養(yǎng)2h，洗去非貼壁細胞保存?zhèn)溆茫N壁細胞為富集的DCs細胞。富集的各組DCs細胞分別用含1000U／mlrhGM—CSF和500U／m1人重組IL一4的AIM—V無

3、血清培養(yǎng)基，第3dJJl入新培養(yǎng)基及rhGMCSF和工L一4：第7d時收獲未成熟DCs，按2103／ml濃度接種24孔板，每孔體積lml，繼續(xù)用rhGM—CSF和IL一4培養(yǎng)，并加入1000U／m1人TNF—o；第8d時收獲DCs，流式細胞儀進行細胞表型分析并進行熒光顯微鏡觀察。同時收集培養(yǎng)上清，一70℃保存，用于檢測IL一12p40含量。A組：為正常人組；B組：為肝癌肝移植組；c組：肝硬化肝移植組：D組：為肝癌手術切除組。結果：在GM

4、—CSF和IL一4的存在下，單個核細胞可被誘導為典型的Des，肝癌肝移植組患者和其他移植組患者的DCs細胞數量為2744256107，較正常人、肝癌切除患者低，其DCs的成熟程度相應偏低、成熟時間也相應偏長。其CD80表達較正常人明顯增高；肝癌肝移植患者CD83表達較肝硬化肝移植增高：肝癌肝移植組CD86表達與正常人無區(qū)別，但肝硬化肝移植組的表達比正常人和肝癌肝切除組降低；HLA—DR表達在肝癌肝移植、肝硬化肝移植和肝癌肝切除組中表達均