七味鐵屑膠囊對(duì)NAFLD大鼠的療效觀察及ERS相關(guān)因子的影響.pdf

1、背景與意義：非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)，是指無(wú)過(guò)量飲酒史，除外病毒、藥物等其他明確損肝因素所致的以彌漫性肝細(xì)胞大泡性脂肪變?yōu)橹饕卣鞯呐R床病理綜合征。NAFLD在我國(guó)已是僅次于病毒性肝炎的第二大慢性肝病，是導(dǎo)致無(wú)癥狀性轉(zhuǎn)氨酶升高的首要病因[1]，成為當(dāng)今學(xué)者們廣泛關(guān)注的問題。目前臨床上NAFLD治療尚無(wú)特效藥物。中醫(yī)學(xué)及民族醫(yī)學(xué)認(rèn)為該病為飲食不節(jié)，嗜食肥甘厚味，肥胖或飲酒過(guò)度，導(dǎo)致氣機(jī)阻滯，濕熱內(nèi)生，痰瘀互結(jié)，阻滯肝絡(luò)[2]。因此

2、，治療應(yīng)以疏肝理氣，活血化瘀，化痰祛濕為主。七味鐵屑膠囊主要由鐵屑(訶子制)、北寒水石、藏木香、木香、甘青青藍(lán)、紅花、五靈脂膏七味藥物組成，全方配伍達(dá)到行氣活血、平肝清熱止痛之功效，治療符合脂肪肝的病機(jī)特征，但機(jī)制尚不明確，因此尋找治療非酒精脂肪性肝病、延緩其進(jìn)程的藥物已成為目前醫(yī)學(xué)界尤其是肝病學(xué)界學(xué)者研究的熱點(diǎn)。為此，將傳統(tǒng)藏藥制備的七味鐵屑膠囊用于治療單純高脂飲食誘發(fā)的NAFLD大鼠，并通過(guò)HE染色、Western blot等技術(shù)，

3、觀察七味鐵屑膠囊治療后NAFLD大鼠肝組織GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表達(dá)變化、血清生化指標(biāo)及肝臟病理組織學(xué)改變的差異，旨在研究七味鐵屑膠囊對(duì)NAFLD有無(wú)確切治療效果并初步探索其作用機(jī)制。
　　 目的：采用單純高脂飲食成功誘導(dǎo)大鼠NAFLD模型，并同時(shí)使用七味鐵屑膠囊進(jìn)行治療12周后，觀察其對(duì)NAFLD大鼠的治療效果，并初步探討其相關(guān)機(jī)制。
　　 方法：選用4周齡Wistar大鼠60只，

4、雄性，隨機(jī)分為4組：①N組(正常組)，基礎(chǔ)飼料喂養(yǎng)；②F組(模型組)，單純高脂飼料喂養(yǎng)，以上兩組各18只，分別于4周(3只)、8周(3只)、12周(12只)3個(gè)時(shí)相點(diǎn)采集標(biāo)本，其中4周、8周標(biāo)本用于驗(yàn)證NAFLD造模成功與否的觀察；③Q組(七味鐵屑膠囊治療組)，純高脂飲食合并七味鐵屑膠囊喂養(yǎng)；④P組(易善復(fù)膠囊陽(yáng)性對(duì)照組)，純高脂飲食合并易善復(fù)膠囊喂養(yǎng)，Q組與P組各12只，分別于12周時(shí)集中采集標(biāo)本。采用HE染色光鏡下觀察各組大鼠肝臟病

5、理組織學(xué)變化：全自動(dòng)生化分析儀檢測(cè)各組大鼠血清丙氨酸轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、天門冬氨酸轉(zhuǎn)氨酶(AST)、甘油三酯(TG)、游離脂肪酸(FFA)水平；用Western blot法檢測(cè)各組大鼠肝組織中GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α蛋白表達(dá)量。
　　 結(jié)果：
　　 1.12周各組大鼠一般情況觀察：
　　 N組大鼠皮毛光澤，體型及活動(dòng)正常。F組大鼠毛色光澤差，活動(dòng)度低，體型肥碩，反應(yīng)遲鈍。Q組與P

6、組大鼠皮毛光澤稍差，活動(dòng)度正常，體型及反應(yīng)敏捷度介于正常與模型組之間。
　　 2.12周各組肝臟外觀變化比較：
　　 N組大鼠肝臟表面光滑，色澤鮮紅，邊緣銳利。F組大鼠肝臟肉眼觀體積增大，顏色淺黃，質(zhì)地軟韌，包膜緊張，邊緣變鈍，切面有油膩感。Q組與P組大鼠肝臟色澤淺黃，質(zhì)地、體積均介于正常與模型組之間，通過(guò)肉眼觀察差別不明顯。
　　 3.12周各組大鼠肝指數(shù)比較：
　　 F組大鼠在造模12周后肝指數(shù)明顯高

7、于N組大鼠(P<0.01)；Q組與P組大鼠肝指數(shù)與F組比較明顯降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。
　　 4.12周各組大鼠肝臟組織病理學(xué)變化及肝臟脂肪變程度和炎癥活動(dòng)度計(jì)分：
　　 N組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)清晰，肝索排列整齊呈放射狀，肝竇正常，細(xì)胞形態(tài)規(guī)則，無(wú)肝細(xì)胞脂肪變，肝臟脂肪變程度計(jì)分為0.00±0.00；F組大鼠肝小葉結(jié)構(gòu)破壞，肝細(xì)胞中大量脂滴，肝臟脂肪變程度計(jì)分為3.75±0.46，與N組比較差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)

8、意義(P<0.01)。Q組與P組大鼠肝小葉界線不清，肝索排列紊亂，脂肪變明顯增加，肝臟脂肪變程度計(jì)分分別為2.50±0.53、2.37±0.51，明顯低于F組(P<0.01)。
　　 N組大鼠肝臟炎癥活動(dòng)度計(jì)分為0.00±0.00；F組大鼠肝臟炎癥明顯，可見小葉內(nèi)散在壞死灶，匯管區(qū)有明顯炎癥，炎癥程度計(jì)分為3.87±0.35，顯著高于正常組(P<0.01)；Q組與P組大鼠肝細(xì)胞點(diǎn)灶狀壞死，肝小葉內(nèi)可見不同程度的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，炎癥活

9、動(dòng)度計(jì)分分別為，2.62±0.51、2.25±0.46，顯著低于F組(P<0.01)。
　　 5.12周時(shí)各組大鼠血清生化指標(biāo)的比較：
　　 F組、Q組、P組大鼠血清AST、ALT、TG、FFA均有升高；與N組比較，F(xiàn)組血清AST、ALT、TG、FFA水平顯著升高(P<0.01)；與F組相比，Q組和P組大鼠血清AST、ALT、TG、FFA明顯降低，有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；Q組和P組二者之間比較，二組大鼠血清AS

10、T、ALT、TG、FFA差別無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　 6.12周各組大鼠GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α的表達(dá)變化：
　　 與N組比較，F(xiàn)組大鼠肝組織GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表達(dá)量顯著增高(P<0.01)；與F組比較，Q組、P組大鼠肝組織GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表達(dá)量顯明顯降低(P<0.01)：而Q組與P組相比

11、，二組的大鼠肝組織GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α表達(dá)量無(wú)明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。
　　 結(jié)論：
　　 1.七味鐵屑膠囊治療NAFLD大鼠12周后，通過(guò)光鏡觀察、血清生化學(xué)檢查，發(fā)現(xiàn)大鼠肝臟脂肪變性程度明顯減輕，血清ALT、AST、TG、FFA水平下降，提示使用傳統(tǒng)藏藥制備的七味鐵屑膠囊可以改善NAFLD大鼠肝功能、降低血脂、糾正脂質(zhì)代謝紊亂，抑制脂質(zhì)在肝細(xì)胞堆積，從而減輕肝臟脂肪變性

12、，達(dá)到治療NAFLD目的。
　　 2.七味鐵屑膠囊治療后的NAFLD大鼠肝組織GRP78、SREBP-1c、Caspase-3、TNF-α蛋白表達(dá)量顯著下調(diào)，提示七味鐵屑膠囊可能通過(guò)下調(diào)大鼠肝組織GRP78蛋白表達(dá)水平，恢復(fù)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)穩(wěn)態(tài)，阻止固醇調(diào)節(jié)級(jí)聯(lián)反應(yīng)及細(xì)胞凋亡等信號(hào)通路的啟動(dòng)，減少TG在肝細(xì)胞內(nèi)蓄積，抑制炎癥反應(yīng)，改善肝細(xì)胞功能，減輕肝臟脂肪變性。這一“ERS-脂質(zhì)代謝紊亂-凋亡及炎癥”通路可能是其治療NAFLD的作用機(jī)制