柴苓湯對環(huán)孢素A腎病大鼠炎癥相關(guān)因子的影響.pdf

1、目的：探討炎癥反應(yīng)在CsA腎?。–CN）中的作用，中藥復(fù)方柴苓湯對其相關(guān)因子的影響，揭示柴苓湯防治CCN的可能作用機制，為中藥的臨床應(yīng)用提供實驗依據(jù)。
　　方法：54只清潔級SD大鼠隨機分為模型組24只，對照組、柴苓湯組、纈沙坦組，每組10只。給予CsA30mg/(kg·d)經(jīng)口灌服28天，建立CsA腎病大鼠模型。對照組每日給予等容量橄欖油灌胃。造模的同時，兩治療組分別給予柴苓湯3g/(kg·d)和纈沙坦10mg/(kg·d)經(jīng)口

2、灌服，模型組和對照組則每日給予等容量生理鹽水。每周末將動物放入代謝籠中，收集24小時尿量，并測體重。模型組分別在實驗第8天、15天、22天、29天，隨機從代謝籠取出6只處死，其余動物于第29天被處死，取血以檢測大鼠血尿素氮（BUN）及血清肌酐（Scr），并計算出肌酐清除率（Ccr）；切取小塊腎臟組織，4％多聚甲醛固定，行HE、Masson染色，觀察各組大鼠腎臟組織病理形態(tài)改變。采用免疫組織化學(xué)及Westernblot法檢測大鼠腎組織中單

3、核細(xì)胞趨化蛋白-1（MCP-1）、腫瘤壞死因子-α（TNF-α）、核轉(zhuǎn)錄因子（NF-κB）與白細(xì)胞介素-1β（IL-1β）蛋白表達。用RT-PCR法檢測大鼠腎組織中的MCP-1、TNF-α、NF-κB、IL-1βmRNA的表達。
　　結(jié)果：
　　1.各組大鼠一般情況比較。對照組大鼠活動度、精神狀況、毛發(fā)、尿量、飲水、飲食量等均無顯著變化。模型組大鼠跟隨時間的改變活動度不斷減少，精神日漸萎靡、對外界反應(yīng)遲鈍、飲水量減少、飲食量

4、下降、毛發(fā)黃而松亂，局部甚至有脫落情況。兩治療組一般情況較模型28d組有所改善。
　　2.腎臟病理形態(tài)學(xué)改變。HE染色顯示：模型7d組，腎間質(zhì)開始水腫，炎性細(xì)胞出現(xiàn)浸潤，腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)輕度變性、濁腫；模型14d組，腎間質(zhì)水腫加重，炎性細(xì)胞浸潤增多，腎小管上皮細(xì)胞變性程度、濁腫程度均有所加大；21d，28d組腎小管上皮細(xì)胞出現(xiàn)壞死、脫落，腎間質(zhì)出現(xiàn)大量炎性細(xì)胞，并伴隨重度水腫；對照組腎小管上皮細(xì)胞未見濁腫，排列相對整齊，腎臟的結(jié)

5、構(gòu)基本正常，腎間質(zhì)亦未發(fā)現(xiàn)水腫，但有少量炎性細(xì)胞浸潤；兩治療組腎間質(zhì)可見炎性細(xì)胞浸潤，腎小管上皮細(xì)胞可見濁腫，但與28d組相比有顯著改善。
　　Masson染色顯示：模型7d組腎組織結(jié)構(gòu)出現(xiàn)輕微紊亂，腎小管基底膜開始增厚，腎間質(zhì)區(qū)可見少量膠原成分沉積；14d組，腎組織結(jié)構(gòu)紊亂程度加重，腎小管基底膜繼續(xù)增厚，腎間質(zhì)區(qū)膠原成分沉積增加；21d組，腎組織結(jié)構(gòu)嚴(yán)重紊亂，腎小管基底膜增厚，偶見有扭曲現(xiàn)象，并伴有輕微的斷裂，大量膠原成分沉積在

6、腎間質(zhì)區(qū)；28d組，腎組織結(jié)構(gòu)極度紊亂，腎小管基底膜不僅大程度上的增厚，同時伴有大量的扭曲、斷裂現(xiàn)象，呈條索狀分布的大量膠原成分沉積在腎間質(zhì)區(qū)；對照組腎小管基底膜完整，有少量膠原分布在腎間質(zhì)區(qū)，腎組織結(jié)構(gòu)清晰；治療組與對照組相比，腎間質(zhì)膠原成分顯著增多，但與28d組相比明顯降低。
　　3.腎功能檢測結(jié)果。與模型7d組比，模型14d、21d、28d組大鼠腎功能明顯降低，BUN、Scr水平明顯升高，Ccr顯著下降；模型14d、21d、

7、28d組BUN、Scr、Ccr水平分別兩兩對比均有明顯差異。與對照組相比，模型28d組大鼠腎功能明顯降低，BUN、Scr水平明顯升高，Ccr顯著下降；用藥后，纈沙坦組與柴苓湯組大鼠腎功能明顯好轉(zhuǎn)，與模型28d組比較BUN、Scr水平顯著降低，Ccr明顯升高。
　　4.RT-PCR檢測各組大鼠腎臟MCP-1、TNF-α、NF-κB、IL-1βmRNA表達。與模型7d相比，模型14d、21d、28d組MCP-1、TNF-α、NF-κB

8、、IL-1βmRNA表達明顯升高，模型14d、21d、28d組MCP-1、TNF-α、NF-κB、IL-1βmRNA表達水平分別兩兩對比均有明顯差異。與對照組比較，模型28d組大鼠MCP-1、TNF-α、NF-κB、IL-1βmRNA表達明顯升高。與模型28d組相比，柴苓湯組、纈紗坦組大鼠MCP-1、TNF-α、NF-κB、IL-1βmRNA表達下降有顯著性差異。
　　5.Westernblot法檢測各組大鼠腎臟MCP-1、TNF

9、-α蛋白表達。與模型7d組比較，模型14d、21d、28d組，MCP-1、TNF-α蛋白表達明顯升高；模型14d、21d、28d組MCP-1、TNF-α蛋白表達水平分別兩兩對比均有明顯差異。與對照組比較，模型28d組大鼠MCP-1、TNF-α蛋白表達明顯升高。與模型28d組相比，兩治療組大鼠MCP-1、TNF-α蛋白表達明顯下降有顯著性差異。
　　6.免疫組化法檢測各組大鼠腎臟NF-κB、IL-1β蛋白表達。與模型7d組比較，模型

10、14d、21d、28d組，NF-κB、IL-1β蛋白表達明顯升高；模型14d、21d、28d組NF-κB、IL-1β蛋白表達水平分別兩兩對比均有明顯差異。與對照組比較，模型28d組大鼠NF-κB、IL-1β蛋白表達明顯升高。與模型28d組相比，纈紗坦組、柴苓湯組大鼠NF-κB、IL-1β蛋白表達均明顯下降。
　　結(jié)論：
　　1.在CCN發(fā)展過程中，腎功能損害、腎臟病理形態(tài)學(xué)改變、炎癥反應(yīng)程度與時間呈正相關(guān)性。
　　2.