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文檔簡(jiǎn)介
1、市場(chǎng)中銷售的動(dòng)物源性食品,通過摻雜、摻假等手段欺騙消費(fèi)者而牟取暴利的事件屢屢出現(xiàn)。為了對(duì)市場(chǎng)上的動(dòng)物源性食品進(jìn)行摻假鑒定,判別與產(chǎn)品標(biāo)簽是否相符,本研究通過DNA條形碼技術(shù)鑒別肉類及其制品,建立基于DAN條形碼技術(shù)的鑒別方法。
1.通過提取牛、羊、豬、雞、鴨、兔、鼠、狗、狐、貉、馬、驢12個(gè)物種的基因組DNA為模板,利用14對(duì)引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序比對(duì)(其中8對(duì)引物根據(jù)12個(gè)物種基因的保守序列設(shè)計(jì),6對(duì)引物來源于參考文獻(xiàn)和數(shù)
2、據(jù)庫(kù)),建立12種動(dòng)物源性食品DNA條形碼鑒別技術(shù)。篩選出通用引物COI-4和COI-14為較優(yōu)序列,其中引物COI-4在除兔肉和驢肉外的10個(gè)物種中擴(kuò)增效率100%,引物COI-14在除狗肉外的11個(gè)物種中擴(kuò)增效率100%,兩對(duì)引物組合可對(duì)12種肉進(jìn)行檢測(cè)。
2.通過定量提取生鮮牛肉、羊肉、豬肉和鴨肉基因組DNA,按一定比例進(jìn)行預(yù)混合,構(gòu)建牛肉摻豬肉、羊肉摻豬肉、牛肉摻鴨肉和羊肉摻鴨肉4種摻假模型。通過引物COI-4和COI
3、-14進(jìn)行PCR擴(kuò)增和測(cè)序比對(duì),建立基于COI基因的動(dòng)物源性食品的摻假判別方法。根據(jù)實(shí)驗(yàn)所得純?nèi)釪NA提取率T實(shí)現(xiàn)DNA水平到肉水平摻假比例的換算。通過引物COI-4,在DNA水平上對(duì)牛-豬、羊-豬、牛-鴨和羊-鴨模型的檢出限分別可以達(dá)到40%、10%、50%和50%,在肉水平上對(duì)牛-豬、羊-豬、牛-鴨和羊-鴨模型的檢出限分別可以達(dá)到40%、15%、19%和28%;通過引物COI-14,在DNA水平上對(duì)牛-豬、羊-豬和牛-鴨模型的檢出限
4、可以達(dá)到5%,羊-鴨的模型的檢出限可以達(dá)到10%,在肉水平上牛-豬、羊-豬、牛-鴨和羊-鴨模型的檢出限分別可以達(dá)到5%、8%、1%和4%。
3.通過建立的DNA條形碼技術(shù)鑒別方法對(duì)市售的動(dòng)物源性食品主要為摻假嚴(yán)重的牛羊肉食品進(jìn)行鑒定,判斷與所貼標(biāo)簽是否相符。本研究成功對(duì)83批次的動(dòng)物源制品完成檢測(cè)及判定,89%的樣品與產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)的成分相符。其中牛肉制品,84%的樣品與產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)的成分相符;羊肉制品,84%的樣品與產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)
5、識(shí)的成分相符;驢肉制品,83%的樣品與產(chǎn)品標(biāo)簽標(biāo)識(shí)的成分相符,其他的肉制品未出現(xiàn)摻假和標(biāo)簽不符現(xiàn)象。
4.為實(shí)現(xiàn)快速檢測(cè),本研究通過引物COI-14進(jìn)行擴(kuò)增,采用AluI和HinfI兩種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行酶切,建立PCR-RFLP鑒別技術(shù)。四種肉的PCR產(chǎn)物通過內(nèi)切酶AluI,牛肉的PCR產(chǎn)物被酶切成188bp和533bp兩個(gè)片段;羊肉的PCR產(chǎn)物被酶切成26bp、227bp和468bp三個(gè)片段;豬肉的PCR產(chǎn)物被酶切成129b
6、p、348bp和373bp三個(gè)片段;鴨肉的PCR產(chǎn)物被酶切成306bp和415bp兩個(gè)片段,四種肉可以通過酶切清晰的分辨出來。四種肉的PCR產(chǎn)物通過內(nèi)切酶HinfI,牛肉的PCR產(chǎn)物被酶切成259bp和462bp兩個(gè)片段;羊肉的PCR產(chǎn)物被酶切成56bp、181bp和514bp三個(gè)片段;豬肉的PCR產(chǎn)物被酶切成193bp、240bp和288bp三個(gè)片段;鴨肉的PCR產(chǎn)物被酶切成356bp和363bp三個(gè)片段,四種肉可以通過酶切清晰的分辨
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