秦艽的組織培養(yǎng)、發(fā)根體系建立及發(fā)根中次生代謝產(chǎn)物的變化.pdf

1、本文以秦艽的葉和下胚軸為外植體，成功的誘導出愈傷組織和再生植株。誘導愈傷組織最合適的培養(yǎng)基為附加2mgL-12，4-D和0.5mgL-16-BA的MS培養(yǎng)基，誘導率可達到100％。愈傷組織轉移到附加2mg·L-12，4-D和0.5mg·L-1KT和500mg·L-1LH的MS培養(yǎng)基上進行繼代培養(yǎng)，增殖后的愈傷組織轉移到附加0.1mg·L-12，4-D和0.5mg·L-16-BA的MS分化培養(yǎng)基上進行分化，其分化率可達到86.67％，將分

2、化出的芽轉接到不加激素的MS上，結果可生長出大量的分化苗。 運用發(fā)根農(nóng)桿菌A4和LBA9402Bin19分別感染秦艽的外植體，經(jīng)實驗可得，只有在加入6mg·L-1IBAMS培養(yǎng)基上才能成功的誘導出發(fā)根，并且以葉片為外植體時，誘導發(fā)根的頻率最高，其中A4的轉化率為87％，LBA9402Bin19的轉化率為63％。將發(fā)根在無激素的MS培養(yǎng)基上生長時，表現(xiàn)出大量的分枝和無向地性等特點。經(jīng)除菌和篩選后，將發(fā)根轉接到不含激素的1/2MS液

3、體培養(yǎng)基上，120r/min，26±2℃黑暗條件下，發(fā)根表現(xiàn)出快速生長的特性，其中A4轉化根每天的平均增加量為95mg/g，LBA9402Bin19轉化根每天的平均增加量為124mg/g。經(jīng)過PCR檢測可知，A4和LBA9402Bin19的Ri質粒中的T-DNA已經(jīng)成功的整合到發(fā)根的基因組DNA中。同時經(jīng)過形態(tài)觀察，經(jīng)A4和LBA9402Bin19感染轉化的發(fā)根符合發(fā)根的基本形態(tài)特點。應用HPLC檢測得知，A4轉化的發(fā)根中的龍膽苦甙含量