HDAC2對(duì)APP-PS1轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用及機(jī)制研究.pdf

1、博士學(xué)位論文學(xué)校代碼：10023學(xué)號(hào)：B2010007004HDAC2對(duì)APP／PSl轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用及機(jī)制研究所院：北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物研究所姓名：劉羽指導(dǎo)教師：秦川教授導(dǎo)師小組：秦川教授張連峰教授魏強(qiáng)教授學(xué)科專(zhuān)業(yè)：病理學(xué)與病理生理學(xué)研究方向：阿爾茨海默病的發(fā)病機(jī)制研究完成日期：二零一三年四月中國(guó)醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院博士學(xué)位論文第一部分HDAC2對(duì)APP／PSl轉(zhuǎn)基因阿爾茨海默病模型小鼠的作用及機(jī)制研究摘要背景阿

2、爾茨海默病(Alzheimer’Sdisease，AD)是以進(jìn)行性癡呆為主要表現(xiàn)的神經(jīng)退行性疾病。主要病理學(xué)表現(xiàn)為，大腦內(nèi)老年斑形成、神經(jīng)元神經(jīng)纖維纏結(jié)、神經(jīng)元和突觸丟失。到目前為止對(duì)AD發(fā)病的機(jī)制研究還不十分清楚。最近研究顯示，除了APP、PS和ApoE基因突變參與AD發(fā)病過(guò)程外，各種各樣的環(huán)境因素成為導(dǎo)致AD發(fā)病的致病岡素之一。表觀調(diào)節(jié)機(jī)制尤其是組蛋白修飾參與AD發(fā)病過(guò)程中突觸丟失、學(xué)習(xí)記憶力損傷。組蛋白乙?；揎検怯山M蛋白乙?；?/p>

3、(HATs)和組蛋白去乙酰酶(HDACs)動(dòng)態(tài)調(diào)節(jié)的結(jié)果。HDAC2在神經(jīng)系統(tǒng)的發(fā)育及生理過(guò)程中起著重要作用，HDAC2主要分布于與學(xué)習(xí)記憶力形成相關(guān)的海馬CAl、CA3、DG區(qū)域，通過(guò)調(diào)節(jié)突觸可塑性相關(guān)蛋白和改變神經(jīng)元回路對(duì)學(xué)習(xí)和記憶力起到負(fù)性調(diào)節(jié)作用。AD患者與同齡人群相比腦組織CAl區(qū)域和內(nèi)嗅皮層的神經(jīng)元中HDAC2表達(dá)量增加，本課題為了探討AD模型小鼠腦部特異性敲除HDAC2后是否對(duì)AD的病理過(guò)程產(chǎn)生影響。方法腦組織特異性敲除H

4、DAC2的模犁小鼠與APP／PSl雙轉(zhuǎn)基因小鼠雜交，獲得APP／PSl腦部特異性敲除HDAC2模型小鼠。檢測(cè)4月齡WT、AD、HDAC2K0和ADHDAC2KO模型小鼠身長(zhǎng)、腦重、體重、腦重比體重系數(shù)等指標(biāo)。免疫組織化學(xué)、免疫熒光化學(xué)和免疫印跡等方法檢鋇JJHDAC2在wT、AD、HDAC2KO、AD—HDAC2KO模型小鼠腦組織表達(dá)情況。應(yīng)用開(kāi)放曠場(chǎng)、新物體識(shí)別實(shí)驗(yàn)不HMorris水迷寓實(shí)驗(yàn)檢；!)!llWT、AD、HDAC2KO及A

5、DHDAC2KO模型小鼠自主活動(dòng)的改變和小鼠學(xué)習(xí)記憶能力的改善情況。免疫組織化學(xué)和硫磺素S染色檢測(cè)腦內(nèi)老年斑含量；應(yīng)用ELISA方法檢測(cè)小鼠腦內(nèi)可溶性A[340不IA[342總量；Westernblotting檢Nd鼠腦內(nèi)APP降解相關(guān)蛋白BACEl、PSl、ADAMl0、ADAMl7、sAPPer、sAPPl3、[3CTF及0【CTF的表達(dá)量；榆測(cè)突觸可塑性相關(guān)蛋白PSD95和突觸素(Syn)的表達(dá)量；檢測(cè)腦部信號(hào)通路分子PAKT、P

6、GSK3[3及P—CREB的變化。結(jié)果4月齡的腦部特異性敲除HDAC2的APP／PSi雙轉(zhuǎn)基岡小鼠，與WTd鼠相比其體長(zhǎng)矮小、體重較輕，而腦重及腦重比體重系數(shù)沒(méi)有差別。免疫組化及免疫熒光結(jié)果顯示，APP／PSl雙轉(zhuǎn)基因小鼠腦部特異性敲除HDAC2后其腦組織中皮層和海馬CAl、齒狀吲DG區(qū)域神經(jīng)元內(nèi)HDAC2被敲除；同時(shí)結(jié)合免疫印跡實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示可有效敲除腦部HDAC2。建立腦部特異性敲除HDAC2的APP／PSl模型小鼠，6月齡模型小鼠在