IL-6在大鼠慢性高眼壓模型中對GAP-43表達影響的實驗研究.pdf

1、第一部分建立大鼠慢性高眼壓模型
　　目的：
　　通過燒灼鞏膜上靜脈構建大鼠慢性高眼壓模型，觀察大鼠模型眼不同時期的眼壓、視網膜形態(tài)學及視網膜神經節(jié)細胞(retinal ganglion cells，RGCs)數(shù)的變化。
　　方法：
　　取35只健康雌性SD大鼠并采用隨機數(shù)字表法隨機分為空白對照組(5只大鼠，5只眼)、假手術組(5只大鼠，5只眼)和手術組(25只大鼠，25只眼)；手術組又分為5小組（術后1天組、術后

2、3天組、術后7天組、術后14天組和術后28天組）每組5只，采用大鼠鞏膜表層的房水引流靜脈燒灼法對手術組大鼠進行高眼壓造模，假手術組以分開結膜不燒灼靜脈做假性對照，空白對照組不做任何處理；各組均以右眼為處理眼。
　　空白對照組、假手術組和手術組（術后28天組）分別于術前、術后30min、第1天、第3天、第5天、第7天、第14天、第28天，采用TonoLab眼壓計測量右眼眼壓，并對測量值進行統(tǒng)計學分析；
　　手術組各小組分別在術

3、后第1天、第3天、第7天、第14天、第28天摘除右眼眼球，左眼做對照眼，石蠟切片，進行HE染色，觀察視網膜形態(tài)變化，并統(tǒng)計視網膜神經節(jié)細胞數(shù)進行分析。
　　結果：
　　眼壓測量：35只大鼠（35眼）術前基線眼壓是（8.4±1.75）mmHg，手術組（術后28天組），高眼壓造模燒灼鞏膜上靜脈30min后術眼眼壓為（15.4±1.52）mmHg，較術前基線眼壓明顯升高（p<0.01）；術后第1天、第3天、第5天、第7天、第14天

4、、第28天測得眼壓均高于空白對照組和假手術組（p<0.01）。
　　手術組各小組（術后1天組、術后3天組、術后7天組、術后14天組和術后28天組）術眼眼眼壓均高于對照眼眼壓（P＜0.01）。
　　RGCs計數(shù)：空白對照組RGCs細胞數(shù)為30.93±3.42（個/高倍視野），光學顯微鏡下大鼠視網膜組織結構層次清晰，由外向內可觀察到：感光層(PL)、外界膜(ELM)、外核層(ONL)、外叢狀層(OPL)、內核層(INL)、內叢狀

5、層(IPL)、神經節(jié)細胞層(GCL)、神經纖維層(NFL)。手術組對照眼與空白對照組RGCs細胞數(shù)相差無統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。手術組術后第1天，視網膜組織水腫，以NFL和IPL最明顯，RGCs細胞數(shù)目較空白對照組減少4.85％，具有統(tǒng)計學意義（p<0.05）。術后第3天、第7天、第14天，RGCs數(shù)依次減少8.63%、15.39%、16.52%及25.06%，晚期視網膜水腫逐漸消腫、萎縮、變薄。假手術組和空白對照組相比，RGCs數(shù)

6、差異無明顯統(tǒng)計學意義（p＞0.05）。
　　結論：
　　成功建立大鼠慢性高眼壓動物模型，其視網膜神經節(jié)細胞減少可能與持續(xù)高眼壓相關。
　　第二部分IL-6在大鼠慢性高眼壓模型中對GAP-43的表達影響
　　目的：
　　觀察白細胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)在大鼠慢性高眼壓模型中，對生長相關蛋白-43(Growth asociated protein-43，GAP-43)在大鼠視網膜中的表

7、達影響，探討其對視網膜神經節(jié)細胞(retinal ganglion cells，RGCs)的相關作用，為臨床RGCs的保護性治療提供實驗依據。
　　方法：
　　取80只健康雌性SD大鼠隨機分為空白對照組、慢性高眼壓組、IL-6治療組和治療對照組4組，每組20只（20只眼）。慢性高眼壓組、IL-6治療組和治療對照組分別進行高眼壓造模，空白對照組不做處理；
　　造模后一周眼壓穩(wěn)定，IL-6治療組進行玻璃體腔注射IL-630

8、0ng，治療對照組玻璃體腔注射等量生理鹽水；
　　根據用藥前后觀察時間將4組各分為4個小組(每小組5只大鼠，5只眼)，各組分別于用藥前，用藥后第1天、第7天、第14天摘除眼球，制作蠟塊切片，分別進行HE染色及免疫組織化學染色。觀察視網膜形態(tài)變化，量化RGCs及分析GAP-43表達的積分光密度，進行統(tǒng)計分析。
　　結果：
　　用藥前與用藥后第1天、第7天、第14天，慢性高眼壓組、IL-6治療組和治療對照組之間眼壓值差異無

9、統(tǒng)計學意義（P>0.05）；均比空白對照組眼壓高（p＜0.01）。
　　用藥前及用藥后第1天，IL-6治療組、慢性高眼壓組和治療對照組之間RGCs計數(shù)差異無統(tǒng)計意義（P>0.05），但均較空白對照組RGCs計數(shù)減少（p＜0.01）。用藥后第7天、第14天，慢性高眼壓組比IL-6治療組RGCs數(shù)目減少明顯，差異顯著（P<0.05）；慢性高眼壓組和治療對照組之間RGCs計數(shù)差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），3組均較空白對照組RGCs計

10、數(shù)減少（p＜0.01）。
　　IL-6治療組在觀察時間內RGCs計數(shù)維持穩(wěn)定（P>0.05），均高于慢性高眼壓組和治療對照組RGCs計數(shù)（P<0.01），但仍較空白對照組RGCs計數(shù)少（P<0.05）。治療對照組和慢性高眼壓組在觀察時間內 RGCs計數(shù)均呈逐漸減少的趨勢（P<0.05）。
　　GAP-43表達于各組神經纖維層、RGCs、以及內叢狀層。用藥前及用藥后第1天，IL-6治療組、慢性高眼壓組與治療對照組之間GAP-4