鯊魚軟骨硫酸角質(zhì)素的制備及其殼聚糖納米?？诡愶L(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎作用的研究.pdf

1、本課題選擇了鯊魚軟骨中的硫酸角質(zhì)素進(jìn)行抗炎作用研究。 硫酸角質(zhì)素(keratan sulfate，KS)屬于糖胺聚糖類化合物，以半乳糖與6-硫酸-N-乙酰氨基葡萄糖通過β1→4糖苷鍵組成的二糖單位為主要重復(fù)雙糖單位，雙糖之間通過β1→3糖苷鍵連接形成線形分子，它是鯊魚軟骨多糖成分中唯一不含糖醛酸的糖胺聚糖，來源于鯊魚軟骨的KS與其他來源的KS相比，結(jié)構(gòu)上的差別主要在于其含有更多的硫酸根取代基。最近研究表明，KS寡糖級(jí)分可作為抗炎

2、劑、抗過敏劑、免疫調(diào)節(jié)劑等，KS二糖片段Gal-6-SO3-(β1,4)-GlcNAc-6-SO3能通過抑制磷酸蛋白激酶C及磷酸肌醇-3激酶通路，從而抑制IL-12的分泌從而起到抗炎用。 本課題研究了來源于鯊魚軟骨的KS的制備，結(jié)構(gòu)解析，殼聚糖納米粒的制備及其對(duì)RA大鼠的治療作用，探討了KS對(duì)大鼠RA炎癥過程中血清中IL-1β和TNF-α含量的影響。 1.鯊魚軟骨多糖的分離和純化將精制的鯊魚軟骨多糖提取物經(jīng)Q Sepha

3、roseTM Fast Flow強(qiáng)離子交換柱層析進(jìn)行分離，Sephadex G-10凝膠柱層析脫鹽后，獲得組成相對(duì)單一的組分，通過糖醛酸反應(yīng)鑒定出KS，并對(duì)其進(jìn)行了分子量、氨基己糖含量、硫酸根含量等理化性質(zhì)及結(jié)構(gòu)特點(diǎn)研究． 2.KS的結(jié)構(gòu)分析利用紅外光譜(IR)、核磁共振光譜(IH-NMR、13C-NMR)結(jié)果分析確定KS的主要分子結(jié)構(gòu)。紅外光譜結(jié)果顯示，KS結(jié)構(gòu)中含有羥基、羰基和酰胺基結(jié)構(gòu)，并含有硫酸基，其結(jié)構(gòu)中不含有糖醛酸，

4、進(jìn)一步說明其為KS。核磁共振結(jié)果顯示，KS多糖分子中除含有Gal及GlcNAc單糖殘基外，還含有NeuAc殘基。 3.KS-CTS納米粒的制備設(shè)計(jì)正交試驗(yàn)，通過考察納米粒粒徑及Zeta電位值，分析了殼聚糖(chitosan，CTS)分子量，KS、CTS溶液體積比等因素對(duì)納米粒制備的影響。確定最佳實(shí)驗(yàn)條件：CTS分子量為5kD，KS、CTS體積比為1:4，pH值為6，KS濃度為1mg/mL，CTS濃度為2mg/mL液體混合滴加速度

5、為3s一滴。納米粒制備中，為減小大鼠灌胃量，在45℃下旋蒸納米粒溶液使體積縮減一半。 4 KS對(duì)大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的治療作用建立大鼠RA模型，對(duì)大鼠體重、足跖腫脹度、X線分析及病理切片確定各組大鼠炎癥情況。結(jié)果顯示，KS能夠減輕炎癥反應(yīng)、降低大鼠足跖腫脹度。研究了KS對(duì)RA大鼠血清中細(xì)胞因子Rat TNF-α、Rat IL-1β的影響，結(jié)果顯示，模型組大鼠血清中細(xì)胞因子Rat TNF-α,含量為14.47±4.832 pg/mL

6、，明顯高于陰性對(duì)照組(4.375±2.611 pg/mL)、陽性對(duì)照組(5.217±2.589 pg/mL)和樣品組(7.086±3.201 pg/mL)(P<0.05)；模型組大鼠血清中細(xì)胞因子Rat IL-1β含量為39.5±17.735 pg/mL，明顯高于陰性對(duì)照組(7.330±2.733 pg/mL)、陽性對(duì)照組(9.038±5.310 pg/mL)、樣品組(15.462±7.281 pg/mL)(P<0.05)。 本