雞胸軟骨粉的制備及其對(duì)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎的作用.pdf

1、類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎(RA)是一種常見的以關(guān)節(jié)組織慢性炎癥病變?yōu)橹饕憩F(xiàn)的全身性疾病。它的發(fā)生是由于機(jī)體內(nèi)的T細(xì)胞因子引起了關(guān)節(jié)組織內(nèi)部對(duì)特異性隱蔽抗原進(jìn)行自身免疫反應(yīng)，在此過程中導(dǎo)致了多關(guān)節(jié)滑膜炎癥，并造成軟骨和骨組織的損害。作為關(guān)節(jié)軟骨主要成分的II型膠原被認(rèn)為是介導(dǎo)類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎發(fā)病的自家抗原成分之一，因此理論上口服補(bǔ)充II型膠原蛋白能使機(jī)體產(chǎn)生免疫耐受，抑制類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎疾病的發(fā)生。雞胸軟骨中含有豐富的II型膠原蛋白和蛋白多糖，且具有

2、來源廣泛、加工便捷、價(jià)格低廉等優(yōu)點(diǎn)，可開發(fā)成一類天然無毒副作用，具有防治類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎功能的保健品。 本論文以雞胸軟骨為原料制備富含II型膠原的軟骨粉，并測(cè)定了軟骨粉的組成和生物活性，這為開發(fā)雞骨資源、解決家禽加工業(yè)的資源綜合利用問題提供了理論基礎(chǔ)，主要研究?jī)?nèi)容如下： 首先以雞胸軟骨為原料，研究了酶法去除雜質(zhì)、脫脂、干燥以及粉碎工藝，制備富含生物活性II型膠原的軟骨粉。采用胃蛋白酶去除軟骨表面雜質(zhì)，最優(yōu)酶解條件為酶濃度4

3、00mg·L-1，溫度28℃，反應(yīng)時(shí)間24h，料水比1:5。酶法處理后的雞胸軟骨切片，浸泡在氯仿：甲醇=2：1的混合溶劑中，勻速攪拌，可除去絕大部分脂肪，脂肪的殘留率為0.05％。脫脂軟骨經(jīng)冷凍干燥36h后，仍然能保持原來的色澤和形態(tài)，水分含量降至2.18％。采用冷凍研磨機(jī)在液氮低溫條件下粉碎雞胸軟骨，最優(yōu)粉碎工藝為預(yù)冷時(shí)間7min，撞擊速度10次·s-1，粉碎時(shí)間9min，所得的軟骨粉的平均粒徑為73.37μm。 制備得到的軟

4、骨粉混懸于4mol·L-1鹽酸胍中，攪拌24h去除非膠原成分后，采用胃蛋白酶酶解提取II型膠原，并對(duì)軟骨粉II型膠原的純度和結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定。結(jié)果顯示，軟骨粉II型膠原在SDS—PAGE電泳譜帶出現(xiàn)的位置與Sigma—Aldrich標(biāo)準(zhǔn)品一致，兩者的RP—HPLC保留時(shí)間接近，氨基酸組成也相似。這說明軟骨粉膠原為典型的II型膠原，其分子可以用α1(Ⅱ)3來表示。軟骨粉II型膠原在近紫外區(qū)220nm附近產(chǎn)生最大吸收，而280nm處吸收很弱，

5、表明其中芳香族氨基酸含量較少，這和氨基酸分析結(jié)果一致，園二色譜在221nm和198nm處分別出現(xiàn)正負(fù)吸收峰，符合II型膠原左旋聚脯氨酸肽鏈的典型特征。軟骨粉II型膠原的FT—IR分析與文獻(xiàn)報(bào)道的天然II型膠原的吸收峰位基本一致。差示掃描量熱儀測(cè)定軟骨粉膠原的變性溫度為44℃，說明軟骨粉II型膠原在制備和提取過程中結(jié)構(gòu)沒有遭到破壞。X—射線衍射測(cè)定結(jié)果表明，軟骨粉II型膠原為三股超螺旋鏈結(jié)構(gòu)，其中每條α鏈?zhǔn)仟?dú)立的左手螺旋結(jié)構(gòu)，衍射峰的強(qiáng)度

6、達(dá)到80％，說明軟骨粉II型膠原很好地保持了三股螺旋結(jié)構(gòu)，因而保持了其生物活性。 以純II型膠原和完全弗氏佐劑免疫Sprague—Dawley(SD)大鼠，建立大鼠的類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎模型(CIA)，研究了口服雞胸軟骨粉和硫酸氨基葡萄糖對(duì)大鼠類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎病程的影響。結(jié)果表明，口服雞胸軟骨粉能明顯降低CIA大鼠的關(guān)節(jié)炎指數(shù)，緩解關(guān)節(jié)紅腫等癥狀。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)組大鼠的T淋巴細(xì)胞增殖受到抑制，抑炎細(xì)胞因子白介素-2(IL-2)水平高于陰性對(duì)