生長分化因子-9(GDF-9)基因與骨形態(tài)發(fā)生蛋白-15(BMP-15)基因在中國漢族多囊卵巢綜合征(PCOS)患者中的突變研究.pdf

1、第一部分目的:多囊卵巢綜合征（polycystic ovary syndrome，PCOS）是涉及多器官、多系統(tǒng)的內分泌紊亂性疾病，臨床表現高度多樣化，如月經稀發(fā)、閉經、多毛、痤瘡、肥胖、胰島素抵抗、高脂血癥等，其病理生理特點為竇前卵泡發(fā)育過多而優(yōu)勢卵泡發(fā)育受阻。生長分化因子-9（growth differentiation factor，GDF-9）是卵母細胞來源的生長因子，屬于轉化生長因子-β（TGF-β）超家族，以自分泌和旁分泌等

2、方式參與卵泡的生長、發(fā)育、成熟與排卵。最近研究發(fā)現PCOS 患者卵巢組織中GDF-9表達延遲且降低，提示GDF-9 異常表達參與了PCOS的發(fā)病。本研究通過對GDF-9基因的突變分析，探討其與PCOS 發(fā)病的關系。
　　 方法:1.收集多囊卵巢綜合征病人和正常對照血液標本各200例，記錄姓名、年齡、初潮年齡、結婚年齡、月經周期、不孕史，身高、體重等，化學標記免疫檢測法測基礎性激素：雌二醇（E2），卵泡刺激素(FSH)，黃體生成素

3、(LH))，睪酮(T)，泌乳素(PRL)。2.用血液基因組DNA提取試劑盒，按照說明從500ul外周血中程序化提取DNA。3.采用primer premeir5引物設計軟件設計引物，聚合酶鏈反應（PCR）特異性擴增目的片段。4.將PCR產物送測序，采用DNA自動測序儀（型號：ABI3730XL），所有產物均行雙向測序。
　　 結果:應用chromas軟件對200例PCOS和200例對照的測序峰圖進行解讀，并在GENEBANK 中

4、行結果比對，在GDF-9基因的第一和第二外顯子編碼區(qū)共發(fā)現10 種變異位點。其中7 種改變僅在PCOS 患者中出現，并導致了氨基酸的改變，屬于錯義突變；而另外3 種變化在對照和病例中均有發(fā)現，屬于單核苷酸多態(tài)性變異（SNP）：c.169G>T，c.447C>T，c.546G>A。在7 種錯義突變中，有5種首次在中國PCOS患者中發(fā)現：c.15C>G，c.118T>G，c.133A>G，c.1025A>T，c.1275C>A。另外兩種突變

5、（c.436C>T，c.1283G>C）已有文獻報道。
　　 結論:GDF-9基因突變可能與PCOS 發(fā)病有關。
　　 第二部分目的:通過對骨形態(tài)發(fā)生蛋白15（BMP-15）基因的突變分析,研究其與多囊卵巢綜合征發(fā)病機制的關系。
　　 方法:收集多囊卵巢綜合征病人和正常對照各200例，聚合酶鏈反應（PCR）特異擴增目的基因片段，應用DNA測序方法檢測基因突變。
　　 結果:在BMP-15基因的第一和第二外