兔骨形態(tài)發(fā)生蛋白15基因的克隆與蛋白的定位分析.pdf

1、BMF15基因是卵母細(xì)胞分泌因子重要成員之一，其在卵泡發(fā)育和卵母細(xì)胞成熟過程中發(fā)揮重要作用。目前，有關(guān)BMPl5基因的研究主要集中于人、山羊、牛、豬等，而尚未見兔BMPl5基因的研究報(bào)道。因此，本文預(yù)通過對(duì)兔BMPl5基因的克隆、蛋白定位及表達(dá)研究，探討B(tài)MPl5在兔生殖系統(tǒng)中所發(fā)揮的作用。 根據(jù)GeBank公布的其它物種的BMPl5基因序列合成引物，采用RT-PCR法從新西蘭大白兔卵母細(xì)胞中克隆出卵母細(xì)胞分泌因子BMPl5基因

2、部分cDNA片段，并進(jìn)行測序。結(jié)果顯示，所克隆的BMPl5基因總擴(kuò)增片段為919bp，橫跨外顯子I、II，經(jīng)blast比對(duì)，該序列與豬、牛、綿羊、山羊、人和小鼠的BMPl5基因cDNA相應(yīng)的同源性分別為83％、82％、82％、82％、80％和75％，為分離、克隆兔BMPl5基因全序列提供了可能。 根據(jù)兔GAPDH cDNA序列設(shè)計(jì)引物，以其PCR產(chǎn)物作為內(nèi)標(biāo)，分別以兔各個(gè)組織反轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物為模板，通過半定量RT-PCR檢測了BMP1

3、5 mRNA在兔多個(gè)組織中的表達(dá)情況，結(jié)果發(fā)現(xiàn)BMPl5除了在卵巢、睪丸中表達(dá)外，還在下丘腦、垂體等非性腺組織中表達(dá)，預(yù)示著BMPl5在這些非性腺組織中也可能發(fā)揮了一定的功能。 采用免疫組化技術(shù)測定BMPl5蛋白在性腺中的定位，結(jié)果顯示：BMPl5蛋白在兔卵巢初級(jí)卵泡、次級(jí)卵泡和有腔卵泡卵母細(xì)胞中均有高度表達(dá)，表明BMPl5蛋白在啟動(dòng)卵泡發(fā)育后的整個(gè)過程中都發(fā)揮一定的作用。同時(shí)，在卵泡腔中也檢測到該蛋白的表達(dá)，卵母細(xì)胞可能將該蛋