低成癮性鎮(zhèn)痛藥物高通量篩選平臺的建立及其初步評價(jià).pdf

1、從胎盤組織提取總RNA,通過RT-PCR得到了κ-型阿片受體的cDNA,經(jīng)過序列分析證實(shí),所獲得的cDNA與文獻(xiàn)報(bào)道的序列完全一致.將κ-型阿片受體的cDNA克隆到pcDNA3.1中,酶切正確的重組質(zhì)粒命名為pOPR4,將pOPR4與pcDNA3.1采用脂質(zhì)體法分別轉(zhuǎn)染CHO細(xì)胞,篩選的單克隆細(xì)胞株分別命名為CHO-OPR和CHO-P,通過PCR鑒定后獲得了8個(gè)陽性細(xì)胞株CHO-OPR1~8和兩個(gè)CHO-P.將8個(gè)重組細(xì)胞株同時(shí)用U69

2、593處理,觀察重組細(xì)胞株表達(dá)的κ-型阿片受體介導(dǎo)胞內(nèi)的信號轉(zhuǎn)導(dǎo)能力的有無及其強(qiáng)弱,得到了兩個(gè)細(xì)胞株CHO-OPR5和CHO-OPR8的信號介導(dǎo)能力最強(qiáng).將CHO-OPR5和CHO-OPR8進(jìn)行受體與特異性配體結(jié)合能力的分析,經(jīng)過受體與特異性配體U69593的結(jié)合實(shí)驗(yàn)表明:κ-型阿片受體在CHO細(xì)胞的表面得到了不同程度的表達(dá),表達(dá)的κ-型阿片受體能與配體U69593特異性結(jié)合,其中CHO-OPR5表達(dá)的κ-型阿片受體對標(biāo)記配體的最大結(jié)合