HPIP對(duì)腫瘤細(xì)胞自噬功能的影響及與LC3B的相互作用.pdf

1、目的:自噬（autophagy）是真核生物細(xì)胞特有的一種生命現(xiàn)象，實(shí)質(zhì)是自噬溶酶體降解體內(nèi)的大分子物質(zhì)（如細(xì)胞器、蛋白質(zhì)等）,為細(xì)胞生存代謝提供營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)。自噬作為Ⅱ型程序性細(xì)胞死亡(typeⅡ programed cell death)，在生物進(jìn)化過(guò)程中具有高度保守性。目前研究發(fā)現(xiàn)，自噬參與了多種疾病的發(fā)生，如病原體感染、神經(jīng)退行性疾病、衰老、腫瘤等。我們的研究方向主要是自噬對(duì)于腫瘤的影響，體外探討HPIP（hematopoietic

2、pre-B-cell leukemia transcription factor-interacting protein，人造血相關(guān)的前B細(xì)胞白血病轉(zhuǎn)錄因子相互作用蛋白）對(duì)腫瘤細(xì)胞自噬的影響。
　　方法:利用PCR技術(shù)從人的乳腺文庫(kù)中擴(kuò)增出LC3B目的基因片段全長(zhǎng)及各分段序列，同時(shí)擴(kuò)增出ATG4B目的基因片段，將這些序列插入到pGEX-KG及pET-28a(K+)載體中，構(gòu)建出重組質(zhì)粒;體外給予不同的自噬誘導(dǎo)條件，通過(guò)免疫熒光實(shí)驗(yàn)

3、觀察HPIP與LC3B的共定位情況;細(xì)胞核質(zhì)分離實(shí)驗(yàn)檢測(cè)HPIP與LC3B的定位;GST pull-down技術(shù)檢測(cè)HPIP與LC3B的作用部位。
　　結(jié)果:免疫共沉淀檢測(cè)到HPIP蛋白與LC3B蛋白存在相互作用;免疫熒光發(fā)現(xiàn)HPIP與LC3B存在共定位;成功構(gòu)建了不同載體的目的基因片段;蛋白水平檢測(cè)HPIP對(duì)自噬有一定的影響;HPIP與ATG4B可共同作用于LC3B，且HPIP與ATG4B也存在相互作用。
　　結(jié)論:HPI