UbiquitinB在17-AAG誘導(dǎo)HeLa細(xì)胞周期阻滯中的作用研究.pdf

1、【研究背景及目的】在多種不同種類的腫瘤模型中，選擇性的抑制Hsp90 功能可誘導(dǎo)細(xì)胞增殖、細(xì)胞周期調(diào)節(jié)和凋亡過程中重要的信號(hào)分子的選擇性降解。本研究在于探討已進(jìn)入臨床試驗(yàn)的Hsp90 抑制劑17-AAG在誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯過程中Ubiquitin B的作用及其作用機(jī)制。
　　 【研究方法】人宮頸癌細(xì)胞系Hela細(xì)胞經(jīng)17-AAG 作用一段時(shí)間后，使用流式細(xì)胞儀和熒光分光光度計(jì)分別檢測(cè)Hela細(xì)胞周期分布情況和細(xì)胞糜蛋白酶樣蛋白酶體

2、活性變化情況； siRNA 干擾細(xì)胞中Ubb基因的正常表達(dá)后，再經(jīng)17-AAG 處理一段時(shí)間，利用Real Time PCR技術(shù)驗(yàn)證siRNA的干擾效應(yīng)，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期的分布情況并用Western Blot 檢測(cè)細(xì)胞周期相關(guān)蛋白的表達(dá)變化。
　　 【研究結(jié)果】 17-AAG 處理24 h后，隨著藥物濃度的升高，HeLa細(xì)胞中G2/M 期的細(xì)胞比例從未加藥處理的（14.38±4.93）％上升到1umol/L 時(shí)的（52.3

3、8±5.67）％，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），同時(shí)蛋白酶體活性顯著增強(qiáng)，Western Blot 檢測(cè)發(fā)現(xiàn)17-AAG 處理24 h后Cdk1和Hec1等周期相關(guān)蛋白下調(diào)，但Mad2的表達(dá)未見明顯變化；利用siRNA 干擾Ubb后，500 nmol/L和1 umol/L的17-AAG 誘導(dǎo)的G2/M 期細(xì)胞比例分別由轉(zhuǎn)染前的（32.68±3.79）％和（43.98±1.99）％下降至轉(zhuǎn)染后的（17.07±2.22）％和（25.9