外源性鋅離子阻斷感光細胞與雙極細胞間的視覺信號傳導并下調視網(wǎng)膜TRPM1的表達.pdf

1、目的:在視網(wǎng)膜中，瞬時受體電位離子通道蛋白M亞家族，亞基1（Transient receptor potential melastatin1，TRPM1），位于ON-雙極細胞上，參與ON-雙極細胞的去極化過程。在脊椎動物的離體視網(wǎng)膜研究中發(fā)現(xiàn)，鋅離子是TRPM1的阻斷劑，但其對活體哺乳動物視網(wǎng)膜功能的影響尚不清楚。本實驗旨在探討鋅離子是否影響哺乳動物視覺信號的傳遞及TRPM1的表達。
　　方法:將C57BL/6J小鼠隨機分為對照組

2、、實驗組。實驗組小鼠右眼玻璃體內注射0.4μl0.01mol/L硫酸鋅溶液，對照組小鼠右眼以等體積的磷酸鹽緩沖液（Phosphate-buffered saline，PBS）代替，左眼均未做注射。為探討鋅離子的作用時間，分別于注射后1小時、1天、1周、4周、8周后行暗適應和明適應視網(wǎng)膜電圖(Electroretinogram，ERG)檢查。用Western blotting檢測注射后1天的小鼠視網(wǎng)膜中TRPM1的表達水平。用免疫熒光法分

3、別標記注射后1天和8周的小鼠視網(wǎng)膜PKCα和CtBP2，以觀察視網(wǎng)膜光感受器和突觸的結構及形態(tài)變化。此外，將50μl0.05 mol/L硫酸鋅溶液注射入恒河猴一眼玻璃體內，并于注射后2小時行暗適應、明適應ERG及ON-OFF反應檢查。
　　結果:在注射硫酸鋅溶液后1天-8周，觀察到小鼠有類似的負波形ERG:暗適應和明適應的ERG-b波振幅明顯降低，而a波相對正常。恒河猴玻璃體腔注射硫酸鋅后也得到了類似結果。在ON-OFF反應中，E

4、RG-b波振幅明顯降低，a波則無明顯改變。實驗組小鼠視網(wǎng)膜中的TRPM1表達量下降。免疫熒光顯示:注射后1天的實驗組小鼠1天視網(wǎng)膜形態(tài)結構無明顯改變。8周后，內層視網(wǎng)膜變薄，內核層尤為明顯，視桿ON-雙極細胞數(shù)量減少，異位的視桿雙極細胞樹突向外核層延伸，同時光感受器突觸帶數(shù)量明顯減少，外核層可見異位的突觸帶。
　　結論:鋅離子能阻斷視網(wǎng)膜感光細胞和視桿和視錐系統(tǒng)ON-雙極細胞間的視覺信號傳遞，對感光細胞的功能影響不明顯。鋅離子能下