高壓氧結(jié)合自由基拮抗劑對大鼠肝臟基質(zhì)金屬蛋白酶-2表達(dá)及活性的影響.pdf

1、目的:研究高壓氧結(jié)合自由基拮抗劑對大鼠肝組織基質(zhì)金屬蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2,MMP-2)表達(dá)和活性的影響,并探討影響MMP-2表達(dá)和活性的介導(dǎo)因素.方法:采用皮下注射CCl<,4>建立大鼠肝纖維化模型.60只Wistar雄性大鼠隨機(jī)分為(1)正常對照組(C)(2)模型組(M)(3)高壓氧組(H)(4)自由基拮抗劑組(Fr)(5)高壓氧結(jié)合自由基拮抗劑組(HFr),分別在模型建立的第2周和第8周給

2、予各處理因素,持續(xù)1周后處死動物.檢測大鼠血清丙二醛(malondialdehyde,MDA)水平(比色法)、MMP-2活性(酶圖法),采用SP免疫組化方法檢測MMP 2、轉(zhuǎn)化生長因子(transforming growth factor-β<,1>,TGF-β<,1>)及金屬硫蛋白(metallothionein,MT)在肝組織中變化及分布情況,并進(jìn)行半定量分析比較,常規(guī)石蠟切片,蘇木素-伊紅染色觀察肝組織病理學(xué)變化,應(yīng)用RT-PCR

3、檢測各組大鼠肝組織MMP-2的基因表達(dá).結(jié)果:病理組織學(xué)檢查證實本次實驗大鼠肝纖維化模型復(fù)制成功.首次干預(yù)后(2周末),高壓氧結(jié)合自由基拮抗劑組大鼠肝重指數(shù)及肝損傷指數(shù)較模型組為輕(P<0.01);肝組織MMP-2蛋白表達(dá)及mRNA水平、血清MMP-2活性均較模型組為低(MMP-2陽性指數(shù):M,56.75±3.03;HFr,5.40±1.34;P<0.01.MMP-2 mRNA:M,0.547±0.013;HFr,0.155±0.005

4、;P<0.01.酶活性:M,10.47±2.23;HFr,1.07±0.73;P<0.05);高壓氧結(jié)合自由基拮抗劑組肝組織TGF-β<,1>表達(dá)強(qiáng)度低于模型組,M蛋白表達(dá)及血清MDA水平均較高壓氧組低,有顯著差異(TGF-β1陽性指數(shù):M,4.96±0.28;HFr,3.28±0.33;P<0.01.MT:H,42.44±5.93;HFr,16.57±2.20;P<0.01.MDA:H,11.798±5.439;HFr,6.303±2

5、.430;P<0.05).再次干預(yù)后(8周末),高壓氧結(jié)合自由基拮抗劑組大鼠肝重指數(shù)及肝纖維化程度較模型組為低,差異顯著(P<0.01);亦明顯低于其他治療組;肝組織MMP-2蛋白表達(dá)及mRNA水平均較模型組為低,而血清MMP-2活性較模型組為高(MMP-2陽性指數(shù):M,106.57±5.54;HFr,12.53±2.51;P<0.01.MMP-2 mRNA:M,0.685±0.014;HFr,0.506±0.013;P<0.01.酶活

6、性:M,4.29±1.13;HFr,9.60±2.32;P<0.05.)肝組織TGF-β<,1>、MT蛋白表達(dá)及血清MDA水平與2周末變化相似.(TGF-β<,1>陽性指數(shù):M,7.76±0.39;HFr,4.97±0.35;P<0.01.MT陽性指數(shù):H,49.92±6.04;HFr,6.50±2.29;P<0.01.MDA:M,14.346±2.579;HFr,6.863±2.822;P<0.05).單用高壓氧組實驗2周末及8周末,

7、肝臟病變略輕于模型組,組織學(xué)半定量無統(tǒng)計學(xué)意義,而血清MDA及肝組織MT在各組中為最高值,略高于模型組,血清MMP-2酶活性高于正常對照組.自由基拮抗劑組在2周末顯示肝損傷程度、MMP-2蛋白表達(dá)及酶活性、TGF-β<,1>蛋白表達(dá)均較模型組為低,MDA、MT為各治療組中最低值;此外還發(fā)現(xiàn)本組在8周末肝纖維化程度與高壓氧組相當(dāng),MMP-2酶活性高于模型組.結(jié)論:1.高壓氧結(jié)合自由基拮抗劑能減輕肝損傷,延緩肝纖維化的進(jìn)展;2.高壓氧結(jié)合自

8、由基拮抗劑在實驗2周末使肝組織MMP-2蛋白表達(dá)下降,mRNA水平下降,血清酶活性下降,在實驗8周末使肝組織MMP-2蛋白表達(dá)下降,mRNA水平下降,血清酶活性升高,總效應(yīng)抑制表達(dá),但存在程度差異.損傷階段使MMP-2酶活性維持在低水平,減少HSCs周圍Ⅳ膠原降解,抑制HSCs的活化;肝纖維化的發(fā)展階段,使得MMP-2活性升高,增加Ⅳ膠原降解,有助于減少ECM沉積;3.各實驗組TGF-β<,1>蛋白表達(dá)變化趨勢與MMP-2表達(dá)一致,提示