內(nèi)嵌雪旺細(xì)胞-生物膜支架神經(jīng)導(dǎo)管的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：理想的組織工程化人工神經(jīng)應(yīng)該由具備特定三維支架結(jié)構(gòu)的可降解神經(jīng)導(dǎo)管和在支架上有序排列的雪旺細(xì)胞(Sc)構(gòu)成。本實(shí)驗(yàn)探討用一種新的可降解生物材料制成雪旺細(xì)胞一神經(jīng)導(dǎo)管復(fù)合物，觀察其修復(fù)大鼠較長距離坐骨神經(jīng)缺損的效果。 材料和方法：實(shí)驗(yàn)分三部分。 第一部分：大量獲得新生鼠雪旺細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究。雪旺細(xì)胞是周圍神經(jīng)系統(tǒng)特有的膠質(zhì)細(xì)胞，對促進(jìn)周圍神經(jīng)損傷后修復(fù)起重要作用。采用二次植塊法、雙酶消化法及二者的混合法分別培養(yǎng)SC，觀

2、察SC生長情況并進(jìn)行了三種方法的比較。 第二部分：雪旺細(xì)胞與不同結(jié)構(gòu)的聚乳酸／羥基乙酸共聚物(PLGA)導(dǎo)管和PLGA生物膜生物相容性實(shí)驗(yàn)研究。將SC分別與神經(jīng)導(dǎo)管和生物膜聯(lián)合培養(yǎng)，觀察SC與材料的相容性及生長情況，并用MTT法檢測材料上SC的相對增殖度。 第三部分：內(nèi)置復(fù)合雪旺細(xì)胞PLGA生物膜支架神經(jīng)導(dǎo)管的實(shí)驗(yàn)研究。采用PLGA制成的生物膜和SC共同培養(yǎng)，將富含SC的生物膜嵌入導(dǎo)管內(nèi)制成人工神經(jīng)，用這種支架材料橋接S

3、D大鼠20mm長坐骨神經(jīng)缺損，觀察該人工神經(jīng)修復(fù)周圍神經(jīng)缺損的效果。 結(jié)果：采用二次植塊和雙酶消化混合法培養(yǎng)SC，通過用細(xì)胞計(jì)數(shù)，S-100染色及MTT法檢測，經(jīng)對比得知該方法較單純的植塊法或雙酶消化法能夠獲得的SC數(shù)量更多，純度更高。經(jīng)Ara-C再次純化后純度無明顯提高，但細(xì)胞的增殖能力卻有所下降。PLGA生物膜和導(dǎo)管分別與SC共同培養(yǎng)后，發(fā)現(xiàn)SC與兩種結(jié)構(gòu)的PLGA均具有良好的相容性，且黏附在材料上的SC經(jīng)酶消化提取后用MT

4、T檢測發(fā)現(xiàn)仍然具有較高的增殖活性。用富含SC的生物膜置入導(dǎo)管后可以使神經(jīng)導(dǎo)管內(nèi)攜帶更多的SC，而PLGA生物膜的編織結(jié)構(gòu)具有固定的排列順序，從而使黏附的SC定向排列形成類似于BUngner帶。用之橋接SD大鼠20mm的神經(jīng)缺損，通過一般觀察、肌電圖測量、組織學(xué)切片和圖像分析測量再生神經(jīng)軸突數(shù)量密度、軸突直徑、髓鞘厚度等方面評(píng)價(jià)修復(fù)效果，均發(fā)現(xiàn)該結(jié)構(gòu)可以有效地橋接神經(jīng)缺損。 結(jié)論：內(nèi)置雪旺細(xì)胞一生物膜支架的神經(jīng)導(dǎo)管有利于神經(jīng)再生，