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文檔簡介
1、Rab蛋白是一類小分子GTPase,屬于Ras超家族成員,在真核細(xì)胞囊泡運(yùn)輸與細(xì)胞間信息傳遞中起到十分重要的作用。目前已經(jīng)發(fā)現(xiàn)的Rab蛋白多數(shù)為高爾基體與膜結(jié)構(gòu)相關(guān)分子,而且新的Rab蛋白越來越多的被發(fā)現(xiàn)和鑒定,但其功能卻仍然不十分清楚。近來報(bào)道表明許多疾病包括癌癥,多囊性疾病等與Rab蛋白異常相關(guān),Rab很有可能成為下一個(gè)疾病治療靶點(diǎn),因此研究Rab蛋白功能、其發(fā)揮功能的機(jī)制以及與Rab相互作用的信號(hào)以及效應(yīng)分子具有十分重要的意義。
2、 本室在以往的研究過程中發(fā)現(xiàn)了新的Rab26全長cDNA序列(AccessionNo.AY646153),將其克隆至pEGFP-N1質(zhì)粒并證實(shí)其為一膜相關(guān)蛋白為了對Rab26功能進(jìn)行進(jìn)一步的研究,純化了Rab26蛋白包涵體,并利用其制備了多克隆抗體,實(shí)驗(yàn)證實(shí)抗Rab26抗血清具有相當(dāng)高的抗體效價(jià)。此外,本文利用實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的pCDNA-Rab以及pEGFP-Rab質(zhì)粒轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,并觀察了陰性組與實(shí)驗(yàn)組再轉(zhuǎn)染后對外源熒光蛋白吞噬
3、功能的差異,發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)染了帶有Rab26基因(pCDNA-Rab和pEGFP-Rab)的細(xì)胞均呈現(xiàn)增強(qiáng)的蛋白吞噬功能,陰性對照組細(xì)胞未觀察到對外源蛋白的吞噬,充分說明Rab26蛋白在細(xì)胞內(nèi)具有十分重要的作用。 病毒生活史從結(jié)合宿主細(xì)胞特異受體進(jìn)而吸附到宿主細(xì)胞開始。對于人類以型肝炎病毒感染,病毒復(fù)制和擴(kuò)增的機(jī)制已經(jīng)有所研究,許多可能的細(xì)胞特異性病毒受體,例如免疫球蛋白A受體、白介素6受體、去唾液酸糖蛋白受體(asialoglycop
4、roteinreceptor,ASGPR)、轉(zhuǎn)鐵蛋白受體,三磷酸甘油醛脫氫酶以及多聚人類學(xué)清白蛋白等等也已經(jīng)有所報(bào)道。但是究竟HBV和細(xì)胞特異結(jié)合的受體為何物還沒有確定的結(jié)論。 本室在利用乙肝表面抗原篩查肝細(xì)胞噬菌體展示庫德過程中發(fā)現(xiàn)了一種能夠特意與乙肝表面抗原結(jié)合的分子,命名為SBP(HB-SBP),實(shí)驗(yàn)證實(shí)該蛋白與乙肝表面抗原聯(lián)合免疫Ba1b/c小鼠可顯著增強(qiáng)抗體血清水平,可能是新的乙肝病毒受體,并可以作為新型乙肝疫苗增效劑
5、克服乙肝表面抗原的耐受狀態(tài)。為了進(jìn)一步明確該蛋白自身在人體充當(dāng)?shù)慕巧?,本文首先利用生物信息學(xué)手段分析了該蛋白的cDNA以及蛋白序列,預(yù)測了該蛋白的空間結(jié)構(gòu)及可能的功能域,另外還模擬了該蛋白與乙肝表面抗原小S蛋白的結(jié)合模式,為以后實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證該蛋白體內(nèi)功能大家基礎(chǔ)。 同時(shí)本文利用本實(shí)驗(yàn)室制備的SBP單克隆抗體,通過組織芯片的方法檢測了該蛋白在人體各組織的存在狀況,利用ELISA方法在乙肝相關(guān)各人群中檢測SBP的天然存在,發(fā)現(xiàn)在健康人、
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