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文檔簡介
1、大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷存在于大黃、何首烏、虎杖等中藥中,近年的研究表明其對腦中真性乙酰膽堿酯酶活力具有可逆性的抑制作用,可提高中樞的乙酰膽堿含量,而且,對海馬神經(jīng)元損傷具有一定的保護作用,因此,大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷既是一種真性乙酰膽堿酯酶可逆性抑制劑,又是海馬神經(jīng)元損傷保護劑,對老年性癡呆等疾病的發(fā)生和發(fā)展的多個環(huán)節(jié)有改善作用。大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷顯著改善由東莨菪堿導致的小鼠學習記憶功能障礙,并顯著提高
2、正常小鼠學習記憶獲得能力,與陽性藥物石杉堿甲比較,兩者無顯著性差異。因此,利用大黃素-8-P-β-D-葡萄糖苷來防治老年性癡呆癥或提高智力有良好的開發(fā)前景。 自然界含有大黃素的中藥材(虎杖、何首烏、大黃、決明子等)中多含有一定量的大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷,但含量較低。目前,生物轉化已成為天然產(chǎn)物結構修飾和改造的有利工具,它是利用生物代謝過程中產(chǎn)生的酶對外源性物質(zhì)進行結構修飾和改造的化學反應。具有選擇性高、條件溫和、無污染
3、、成本低、副產(chǎn)物少等優(yōu)點。因此,本課題欲通過生物技術制備大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷,研制開發(fā)防治老年性癡呆的藥物,對已逐漸進入老年化的當今社會具有不可低估的意義。 第一部分文獻研究 一、對何首烏、虎杖中的化學成分及藥理作用進行綜述; 二、對生物轉化及生物酶法提取在中藥中的應用及進展進行綜述。 第二部分大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷制備方法的研究 第一章經(jīng)典方法制備大黃素-8-O-β-D-葡
4、萄糖苷采用溶劑回流提取-柱色譜分離法分別從中藥何首烏和虎杖中分離得到大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷,大黃素甲醚-8-O-β-D-葡萄糖苷,大黃素及白藜蘆醇苷。 第二章生物法制備大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷 一、植物培養(yǎng)物對大黃素的生物轉化制備大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷首次采用植物培養(yǎng)物對大黃素進行生物轉化,并以轉化率為指標篩選出最佳的轉化條件。 首次建立長春花懸浮細胞培養(yǎng)體系中大黃素-8-O-β-D-
5、葡萄糖苷含量測定的方法:色譜柱:Diamonsil<'TM>(鉆石)C<,18>色譜柱(250mm×4.6mm,5μm); 流動相:甲醇-水-甲酸(70:29.6:0.4)V/V;流速:1mL·min<'-1>;檢測波長:280nm;柱溫:室溫?;貧w方程:Y=3E+06X-54.143,相關系數(shù)r=0.9998,大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的線性范圍:0.015μg~0.075μg。 二、生物酶法從中藥材中提取結合葸
6、醌的最佳工藝篩選首次采用正交實驗法優(yōu)化篩選用纖維素酶法從大黃中提取結合葸醌的最佳工藝。以結合葸醌平均含量(%)和干膏率的平均值為兩指標,采用加權法來綜合評價,結合葸醌平均含量(%)的得分(X)的權為60%,干膏率平均值的得分(Y)的權為40%,綜合評分為Z=60%X+40%Y,最佳工藝40℃,酶解1h,pH=7。 三、微生物酶轉化法外源物質(zhì)6-乙酰大黃素制備實驗條件 篩選6-乙酰大黃素是微生物酶轉化制備大黃素-8-O-β
7、-D-葡萄糖苷的外源物質(zhì)。本實驗采用單因素法、以IR光譜測定結果及TLC結果為參考,篩選出制備6-乙酰大黃素的最佳條件:取精制大黃素置三角瓶中,50℃干燥1h,以大黃素-試劑(1:3)加入醋酐,于沸水浴回流,迅速加入冷水,振搖,冰箱放置,抽濾,水洗,50℃干燥,即得。 第三部分何首烏藥材中大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定 首次建立何首烏藥材中大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷的含量測定的方法:色譜柱:Diamon
8、sil<'TM>(鉆石)C<,18>色譜柱(250mm×4.6mm,5μm);流動相:甲醇-水-甲酸(70:29.6:0.4)V/V;流速:1mL·min<'-1>;檢測波長:280nm;柱溫:室溫?;貧w方程:Y=3E+06X+2187.5,相關系數(shù)為r=0.9999,大黃素-8-O-β-D-葡萄糖苷線性范圍在0.060μg~0.300μg。含量測定結果表明,該方法操作簡便,結果準確,具有良好的重復性,回收率合格,可用于測定何首烏中大黃
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