真皮干細(xì)胞在創(chuàng)面修復(fù)中作用的初步研究.pdf

1、創(chuàng)面愈合是一個復(fù)雜的生物學(xué)過程,涉及多種修復(fù)細(xì)胞的增殖、遷移、分化、凋亡等過程,其可分為三個階段即:炎癥反應(yīng)期、細(xì)胞增生期和組織重塑期。修復(fù)細(xì)胞是創(chuàng)面修復(fù)的主體,其生物學(xué)行為是創(chuàng)面愈合研究中的重要科學(xué)問題。研究表明,干細(xì)胞是組織自我更新和再生修復(fù)的細(xì)胞來源,其還通過分泌大量的細(xì)胞因子,促進肉芽組織形成、血管再生等修復(fù)過程。以往對表皮干細(xì)胞、毛囊干細(xì)胞與創(chuàng)面愈合的關(guān)系進行了較多研究,但對于原位真皮干細(xì)胞在創(chuàng)面愈合過程中的作用尚未完全闡明。

2、
　　本課題重點研究了小鼠全層皮膚損傷后創(chuàng)面局部真皮干細(xì)胞是否被激活及其在創(chuàng)面修復(fù)中的作用。首先采用BrdU標(biāo)記法分別檢測全層皮膚損傷后創(chuàng)面局部修復(fù)細(xì)胞增殖反應(yīng)的和標(biāo)記滯留細(xì)胞(LRCs)的變化特點;進而分離和培養(yǎng)肉芽組織來源真皮干細(xì)胞,并通過與新生鼠真皮細(xì)胞和成年鼠真皮細(xì)胞在增殖能力、集落形成能力及多向誘導(dǎo)分化潛能等方面進行對比,研究了肉芽組織來源細(xì)胞的干細(xì)胞相關(guān)生物學(xué)特性;進一步通過檢測肉芽組織來源細(xì)胞和成年鼠真皮細(xì)胞內(nèi)活性氧

3、(ROS)含量及ROS對肉芽組織來源細(xì)胞集落形成能力及多向誘導(dǎo)分化潛能的影響,探討了ROS對創(chuàng)傷后真皮干細(xì)胞的調(diào)控作用,得到如下結(jié)果和結(jié)論:
　　1.采用短時間BrdU標(biāo)記快速分裂細(xì)胞(RDCs)的方法檢測了創(chuàng)面局部修復(fù)細(xì)胞增殖反應(yīng)情況,發(fā)現(xiàn)在正常皮膚組織中,僅表皮、毛囊組織中存在少量的RDCs,但在創(chuàng)傷后創(chuàng)面局部的表皮、毛囊和真皮組織均發(fā)生了明顯的細(xì)胞增殖反應(yīng),表明皮膚創(chuàng)傷后局部表皮、毛囊和真皮組織細(xì)胞參與了創(chuàng)傷修復(fù)。
　

4、　2.采用連續(xù)BrdU標(biāo)記的方法檢測LRCs,發(fā)現(xiàn)創(chuàng)面愈合后肉芽組織中存在LRCs,而正常的真皮組織中未檢測到LRCs,在分離被標(biāo)記的肉芽組織來源細(xì)胞后的體外培養(yǎng)發(fā)現(xiàn),肉芽組織來源細(xì)胞具有集落形成能力,且在形成的集落中也發(fā)現(xiàn)存在LRCs,提示創(chuàng)傷后真皮干細(xì)胞被激活并參與了肉芽組織的形成。
　　3.通過比較肉芽組織來源細(xì)胞、成年鼠真皮細(xì)胞和新生鼠真皮細(xì)胞的的生物學(xué)特性,發(fā)現(xiàn)肉芽組織來源細(xì)胞較成年鼠真皮細(xì)胞和新生鼠真皮細(xì)胞有更強的增殖

5、能力、集落形成能力和成骨、成脂誘導(dǎo)分化的能力,且表達間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志CD105,不表達造血干細(xì)胞標(biāo)志CD45,進一步支持創(chuàng)傷后真皮干細(xì)胞被激活并參與組織修復(fù)。
　　4.通過檢測內(nèi)源性ROS,發(fā)現(xiàn)肉芽組織來源細(xì)胞中ROS水平較正常成年鼠真皮細(xì)胞明顯增高(P<0.01),ROS清除劑NAC作用肉芽組織來源細(xì)胞后,其形成的集落數(shù)和集落的大小均顯著高于對照組(P<0.01),而成脂、成骨分化與對照組相比沒有明顯差異,提示創(chuàng)傷后內(nèi)源性R