蝎毒多肽提取物對(duì)HepG2肝癌血管生成抑制作用的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：
　　 研究蝎毒多肽提取物對(duì)腫瘤微環(huán)境中血管生成相關(guān)因子VEGF、HPA、survin、CD34表達(dá)的影響，觀察對(duì)HepG2肝癌生長(zhǎng)的抑制作用，進(jìn)一步探討其抗血管生成的分子機(jī)制，揭示PESV的抗腫瘤作用機(jī)理，為肝癌的治療提供理論依據(jù)，從而將PESV與傳統(tǒng)的化療藥物相結(jié)合。
　　 方法：
　　 1.MTT法檢測(cè)細(xì)胞增殖抑制率，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期變化。
　　 2.建立HepG2肝癌皮下種植瘤模型，將

2、荷瘤動(dòng)物隨機(jī)分為荷瘤對(duì)照組、PESV組和陽性對(duì)照組，陽性對(duì)照組采用順鉑作為陽性對(duì)照藥物，檢測(cè)腫瘤體積并計(jì)算抑瘤率，觀察PESV對(duì)腫瘤生長(zhǎng)的抑制作用。
　　 3.常規(guī)HE染色，觀察腫瘤組織病理變化。
　　 4.免疫組化法檢測(cè)腫瘤組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、乙酰肝素酶(HPA)、survin、CD34的表達(dá)。
　　 5.Westem-blot方法檢測(cè)瘤組織血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)、乙酰肝素酶(HPA)、su

3、rvivin的表達(dá)。
　　 結(jié)果：
　　 1.PESV對(duì)細(xì)胞增殖抑制率及細(xì)胞周期的影響
　　 與陰性對(duì)照組相比，PESV＜20μg·mL-1時(shí)，作用于HepG2肝癌細(xì)胞48h后，抑制增殖作用不明顯。但當(dāng)PESV＞40μg·mL-1時(shí)，抑制增殖作用明顯增強(qiáng)，與陰性對(duì)照組相比，P＜0.05，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。20～100μg.mL-1劑量組之間兩兩比較差異顯著均，P＜0.05，總體呈劑量.效應(yīng)關(guān)系。流式細(xì)胞術(shù)結(jié)果顯示

4、，PESV能使細(xì)胞周期阻滯于G0/G1期，減少S期及G2/M期的細(xì)胞比例，與陰性對(duì)照組相比，P＜0.05，順鉑組與PESV組相比，P＜0.05，差異顯著。
　　 2.PESV對(duì)HepG2肝癌生長(zhǎng)的影響
　　 荷瘤對(duì)照組、PESV組和陽性對(duì)照組小鼠移植腫瘤的體積明顯增大。分別與荷瘤對(duì)照組相比，PESV組和陽性對(duì)照組對(duì)腫瘤體積的抑制作用較明顯，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。與荷瘤對(duì)照組相比，各給藥組小鼠的腫瘤重量明顯降低

5、，差異顯著。PESV組和陽性對(duì)照小鼠的瘤重分別為1.22±0.15g和0.80±0.22g。其中，陽性對(duì)照組對(duì)腫瘤的抑制作用最強(qiáng)，PESV對(duì)腫瘤組織也有較強(qiáng)的抑制作用，抑瘤率分別為63.51％和47.17％。
　　 3、PESV對(duì)腫瘤組織中VEGF、HPA、survlvin、CD34表達(dá)的影響
　　 免疫組織化學(xué)染色顯示，VEGF、HPA、survivin陽性產(chǎn)物呈棕黃色顆粒，主要定位于腫瘤細(xì)胞胞漿，CD34陽性產(chǎn)物表達(dá)

6、于腫瘤組織微血管內(nèi)皮細(xì)胞，’經(jīng)半定量圖像分析，PESV組和陽性對(duì)照組腫瘤組織VEGF、HPA、survin表達(dá)明顯低于對(duì)照組(P＜0.05)。
　　 4、PESV對(duì)腫瘤組織中VEGF、HPA、survin蛋白表達(dá)的影響
　　 荷瘤對(duì)照組、PESV組和陽性對(duì)照組均可檢測(cè)到VEGF、HPA、survivin蛋白的表達(dá)，與荷瘤對(duì)照組相比，PESV組和陽性對(duì)照組VEGF、HPA、survivin蛋白水平均明顯減弱，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意