蝎毒多肽提取物聯(lián)合5-氟尿嘧啶對H22肝癌抑制作用的實驗研究.pdf

1、目的:
　　 觀察蝎毒多肽提取物(PESV)聯(lián)合5-氟尿嘧啶(5-Fu)對H22肝癌的生長、微血管密度及NF-κ Bp65、MMP-9和VEGF表達的影響，進一步揭示PESV抗癌的作用機制，以為其輔助傳統(tǒng)化療藥物用于臨床抗腫瘤治療提供理論依據(jù)。
　　 方法:
　　 1.建立小鼠H22肝癌皮下荷瘤模型，隨機分為荷瘤對照組、PESV組、化療組（即5-Fu組）和聯(lián)合組（即PESV+5-Fu組），每組10只，連續(xù)干預(yù)21

2、天。隔日測量腫瘤體積，繪制腫瘤體積增長曲線并計算抑瘤率，觀察PESV聯(lián)合5-Fu對H22肝癌移植瘤生長的抑制作用。
　　 2.常規(guī)HE染色，光鏡下觀察H22肝癌組織病理學(xué)改變。
　　 3.CD34標(biāo)記腫瘤微血管，檢測H22肝癌組織微血管密度(MVD)，觀察PESV聯(lián)合5-Fu對H22肝癌血管生成的影響。
　　 4.免疫組織化學(xué)和Western blot法檢測H22肝癌組織NF-κBp65、MMP-9和VEGF蛋白

3、表達水平。
　　 5.RT-PCR法檢測H22肝癌組織NF-κ Bp65、MMP-9和VEGF mRNA表達水平。
　　 結(jié)果:
　　 1.PESV聯(lián)合5-Fu對小鼠H22肝癌移植瘤生長的影響
　　 藥物干預(yù)后，PESV組、化療組和聯(lián)合組小鼠H22肝癌移植瘤體積增長速度較荷瘤對照組均明顯減慢，瘤重亦顯著降低，抑瘤率分別為18.98％、25.59％、44.24％，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05或P＜0.0

4、1）;與化療組比較，聯(lián)合組的瘤重和腫瘤體積亦均存在顯著差異(P＜0.05)。
　　 2.各組腫瘤組織的病理學(xué)變化
　　 HE染色顯示，聯(lián)合組可見大面積壞死區(qū)，較多腫瘤細胞呈細胞核碎裂、核固縮等凋亡和壞死的形態(tài)學(xué)改變;荷瘤對照組壞死區(qū)較少，且壞死面積較小，腫瘤細胞生長旺盛，壞死及凋亡細胞較少;PESV組和化療組亦有明顯壞死，但壞死程度較聯(lián)合作用組明顯減輕。
　　 3、.PESV聯(lián)合5-Fu對H22肝癌組織新生血管形

5、成的影響
　　 與荷瘤對照組比較，聯(lián)合組MVD明顯降低，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.01)，化療組MVD亦降低(P＜0.05);與PESV組和化療組比較，聯(lián)合組MVD亦明顯降低(P＜0.01)。
　　 4、PESV聯(lián)合5-Fu對H22肝癌組織NF-κBp65、MMP-9和VEGF蛋白表達的影響
　　 免疫組織化學(xué)法檢測結(jié)果顯示，與荷瘤對照組比較，聯(lián)合組NF-κB p65、MMP-9和VEGF表達量均顯著減少(P＜0

6、.01);與化療組比較，聯(lián)合組NF-κB p65、MMP-9和VEGF表達量亦明顯減少(P＜0.01);相關(guān)分析得出，NF-κB p65、MMP-9和VEGF的蛋白表達量均與MVD成正相關(guān)(P＜0.01); NF-κB p65和MMP-9、NF-κBp65和VEGF、MMP-9和VEGF之間的蛋白表達量亦存在顯著正相關(guān)(P＜0.01)。Western blot法檢測結(jié)果與免疫組織化學(xué)法結(jié)果基本一致。
　　 5、PESV聯(lián)合5-F

7、u對H22肝癌組織NF-κ Bp65、MMP-9和VEGF mRNA表達水平的影響
　　 RT-PCR法檢測結(jié)果顯示，與荷瘤對照組和化療組比較，聯(lián)合組NF-κB p65、MMP-9和VEGF mRNA表達均明顯減少(P＜0.01); NF-κB p65和MMP-9、NF-κBp65和VEGF、MMP-9和VEGF之間的mRNA表達量均存在顯著正相關(guān)(P＜0.01)。
　　 結(jié)論:
　　 1.PESV聯(lián)合5-Fu可