南蛇藤乙酸乙酯提取物對肝癌HepG2細胞細胞毒作用及誘導其凋亡實驗研究.pdf

1、細胞凋亡是指為維持內環(huán)境穩(wěn)定，由基因控制的細胞自主的有序的死亡。Caspases家族、Bcl-2家族、p53等多種因子都參與激活或調節(jié)細胞凋亡，其中Caspase-3廣泛分布于各種不同類型的細胞中，是Caspase家族中最重要的凋亡執(zhí)行者之一，激活的Caspase-3能使許多與細胞結構、細胞周期及DNA修復等相關蛋白或激酶失活，從而誘發(fā)細胞凋亡。從細胞凋亡這一新視角來揭示中藥抗腫瘤的作用機制，篩選抗癌中藥具有十分重要的意義。
　　

2、 南蛇藤(CelastrusorbiculatusThunb.)為衛(wèi)矛科南蛇藤(celastrus)屬植物，分布廣泛，其藤莖、根、葉、果均可入藥。現(xiàn)代藥物化學研究證實，其具有抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、抗菌、抗病毒、抗生育等廣泛的藥理活性。目前，國內外對南蛇藤抗癌活性及機理研究有一定的報道。但對南蛇藤誘導腫瘤細胞凋亡及其途徑的系統(tǒng)研究并不充分。本課題將以南蛇藤乙酸乙酯提取物為研究對象，觀察其體外對腫瘤細胞增殖的抑制作用，并從細胞凋亡角度研究南蛇

3、藤抗腫瘤細胞作用，為南蛇藤應用于開發(fā)研究奠定基礎。
　　 目的:
　　 研究南蛇藤乙酸乙酯提取物體外抑制腫瘤細胞增殖和誘導腫瘤細胞凋亡的作用，初步探討其誘導腫瘤細胞凋亡的途徑，為南蛇藤的進一步研究開拓思路。方法：
　　 (1)采用cck-8法檢測不同濃度南蛇藤乙酸乙酯提取物對肝癌HepG2細胞增殖的影響。
　　 (2)采用AnnexinV-FITC與碘化丙啶(promideiodine，PI)雙染色法通過

4、流式細胞術檢測南蛇藤乙酸乙酯提取物干預肝癌HepG2細胞24小時后的凋亡數(shù)。
　　 (3)應用流式細胞儀技術檢測南蛇藤乙酸乙酯提取物干預24小時后，對肝癌HepG2細胞周期的影響。
　　 結果：
　　 (1)5個濃度的南蛇藤乙酸乙酯提取物（30、60、120、240、300ug/ml）對HepG2細胞均有一定的抑制作用，且呈劑量依賴性。經統(tǒng)計學分析差異顯著（P＜0.05）。
　　 (2)細胞早期凋亡（An

5、nexinV-PI檢測數(shù)據）表明隨著南蛇藤提取物濃度（15-120μg/ml）的提高，凋亡細胞的數(shù)量在一定程度上有量效作用。
　　 (3)藥物干預HepG2細胞24h后，細胞周期停滯在G0-G1期，其中240μg/ml最為顯著（P=0.01）；同時HepG2細胞產生了亞二倍峰，說明發(fā)生了細胞凋亡。
　　 結論：
　　 南蛇藤乙酸乙酯提取物具有較強的體外抗腫瘤作用，凋亡是其殺傷腫瘤細胞的途徑之一；抗腫瘤的機理是通過