咖啡因?qū)53缺失型人肺腺癌細(xì)胞H1299的放射增敏作用及機(jī)制研究.pdf

1、目的：觀察p53缺失型人肺腺癌H1299細(xì)胞受X線照射后G2期阻滯的情況，以及藥物咖啡因能否去除照射后G2期阻滯并增加細(xì)胞的放射敏感性，初步探討咖啡因增加放射敏感性的可能機(jī)制。
　　 方法：選用已知p53缺失型人肺腺癌H1299細(xì)胞系為研究對象。（1）臺盼藍(lán)拒染法檢測不同濃度的咖啡因?qū)1299細(xì)胞的生長抑制作用，MTT法檢測咖啡因在不同時間點(diǎn)對H1299細(xì)胞存活率的影響；（2）細(xì)胞克隆實(shí)驗(yàn)觀察咖啡因?qū)1299細(xì)胞的放射增敏作

2、用并計算放射增敏比；（3）流式細(xì)胞儀技術(shù)檢測X線照射對H1299細(xì)胞周期的影響，以及咖啡因?qū)φ丈湟鸬腍1299細(xì)胞G2期阻滯的影響；（4）采用流式細(xì)胞儀技術(shù)測定咖啡因?qū)φ丈湔T發(fā)的H1299細(xì)胞凋亡的影響：（5）實(shí)時熒光定量PCR檢測H1299細(xì)胞受照后Cdc2 mRNA表達(dá)的變化以及咖啡因?qū)κ苷占?xì)胞Cdc2 mRNA表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：（1）咖啡因可顯著抑制H1299細(xì)胞的生長并呈濃度依賴性和時間依賴性；（2）咖啡因能明

3、顯降低放射后H1299細(xì)胞的克隆形成率，1mmol/L，和2mmol/L咖啡因?qū)1299細(xì)胞的放射增敏比分別為1.20和2.07；（3）X線照射0Gy、2Gy、4Gy和6Gy24小時后H1299細(xì)胞的G2期比例分別為13.800％、20.026％、26.929％和49.163％，細(xì)胞G2期阻滯程度與照射劑量呈正相關(guān)；（4）咖啡因能夠去除照射引起的G2期阻滯，細(xì)胞照射后加入咖啡因1mmol/L、2mmol/L、3mmol/L、4mmol

4、/L和5mmol/L，G2期比例從單純照射組的20.026％分別下降至15.866％、11.271％、3.461％、3.281％和3.208％，咖啡因去除G2期阻滯的程度與藥物濃度呈正相關(guān)；（5）咖啡因能夠促進(jìn)受照射H1299細(xì)胞的凋亡，照射后24小時H1299細(xì)胞凋亡率從單純照射組10.2％上升到照射加咖啡因組的26.3％；（6）H1299細(xì)胞受照射后，隨著細(xì)胞G2期阻滯，細(xì)胞周期蛋白Cdc2 mRNA的表達(dá)相應(yīng)增加；咖啡因能夠抑制照

5、射后細(xì)胞Cdc2 mRNA的表達(dá)，并與該藥去除細(xì)胞G2期阻滯的過程相一致。
　　 結(jié)論：（1）咖啡因能抑制p53缺失型人肺腺癌H1299細(xì)胞的生長；（2）咖啡因能增加p53缺失型人肺腺癌H1299細(xì)胞的放射敏感性；（3）咖啡因可以解除X射線誘導(dǎo)的G2期阻滯，抑制照射所致的DNA損傷的修復(fù)，促進(jìn)照射所致的細(xì)胞凋亡；（4）咖啡因能降低照射后H1299細(xì)胞Cdc2 mRNA的表達(dá)，表明咖啡因是通過改變細(xì)胞周期調(diào)控的信號因子來發(fā)揮放射增