自發(fā)性高血壓大鼠血液和組織SOD、MDA、NO、ET的水平及瑞舒伐他汀干預(yù)的影響.pdf

1、目的：醫(yī)學(xué)的發(fā)展使人們逐漸認(rèn)識到氧自由基損害和血管內(nèi)皮功能失調(diào)與高血壓的發(fā)生、發(fā)展、轉(zhuǎn)歸有密切關(guān)系。在生理?xiàng)l件下，活性氧族(ROS)的生成與清除處于動態(tài)平衡狀態(tài)，不會對機(jī)體造成影響，ROS水平由內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)調(diào)節(jié)，超氧化物歧化酶(SOD)就是重要的抗氧化酶之一。在高血壓狀態(tài)下，ROS增多，SOD減少，此外，過多的ROS能攻擊生物膜中的不飽和脂肪酸，引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，形成脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物，如丙二醛(MDA)，所以MDA增加。脂質(zhì)過氧化產(chǎn)

2、物通過鏈?zhǔn)椒糯蠓磻?yīng)放大ROS的作用，因而MDA的含量?？煞从硻C(jī)體內(nèi)脂質(zhì)過氧化程度和氧化應(yīng)激水平。一氧化氮(NO)和內(nèi)皮素(ET)是血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生和釋放的兩種生物學(xué)效應(yīng)相反的舒縮血管因子，正常情況下兩者持續(xù)不斷的釋放入臨近血管平滑肌，調(diào)節(jié)血管的舒縮狀態(tài)，以維持血壓的穩(wěn)定、組織的灌流。高血壓患者血管內(nèi)皮損傷，引起炎性細(xì)胞粘附、激活和吞噬反應(yīng)，導(dǎo)致自由基大量產(chǎn)生，氧自由基可損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞，滅活NO，亦可抑制血管內(nèi)皮細(xì)胞合成與釋放NO，造成

3、NO合成、釋放相對不足，ET合成、釋放相對增加。
　　 氧自由基損害及隨之形成的內(nèi)皮功能障礙對高血壓及并發(fā)癥的發(fā)生發(fā)展均起到重要作用，高血壓患者除應(yīng)積極控制血壓外，還應(yīng)重視氧自由基清除，減少脂質(zhì)過氧化作用，改善內(nèi)皮功能。近年來國內(nèi)外一些大型臨床試驗(yàn)證明他汀類藥物（HMG-COA還原酶抑制劑）不僅具有較強(qiáng)的降脂作用，還可發(fā)揮抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、保護(hù)內(nèi)皮、抗血栓、穩(wěn)定斑塊、對心肌結(jié)構(gòu)和功能的保護(hù)等作用。
　　 本實(shí)驗(yàn)通過

4、檢測自發(fā)性高血壓大鼠(spontaneouslyhypertensionrats，SHR)血液和心肌組織中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、一氧化氮(NO)、內(nèi)皮素(ET)水平的變化及相關(guān)分析，以觀察氧自由基損害和血管內(nèi)皮功能失調(diào)與高血壓發(fā)生的關(guān)系；通過應(yīng)用不同劑量的瑞舒伐他汀干預(yù)后了解上述指標(biāo)和SODmRNA表達(dá)的變化，探討其對高血壓患者氧化應(yīng)激及內(nèi)皮功能的影響及可能的機(jī)制，即瑞舒伐他汀是否可以發(fā)揮抗氧化、保護(hù)內(nèi)皮的作用及有

5、無量效關(guān)系，進(jìn)而為臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　 方法：本研究將8只Wistar-Kyoto大鼠(WKY)作為正常對照組(N組)；32只SHR大鼠，隨機(jī)分為四組，分別為瑞舒伐他汀3.125mg/(kg.d)組（T1組）、瑞舒伐他汀6.25mg/(kg.d)組（T2組）、瑞舒伐他汀12.5mg/(kg.d)組（T3組）和SHR對照組（H組）。每組8只（均為雄性9-10周齡、體重240-260g，清潔級）。各組之間體重、SHR分組之間

6、血壓無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。瑞舒伐他汀喂藥組采用灌胃法分別給予瑞舒伐他汀3.125mg/(kg.d)、6.25mg/(kg.d)、12.5mg/(kg.d)加蒸餾水1ml灌胃；SHR對照組給予相同容積的蒸餾水，共喂藥4周。喂藥前后對WKY、SHR大鼠測量血壓。4周后，麻醉后抽取血液并提取心肌組織，血液及心肌組織中SOD、MDA、NO的測定采用比色法，血液中ET的測定采用放免法，心肌組織中ET的測定采用免疫組化法，SODmRNA的測

7、定采用反轉(zhuǎn)錄PCR法。所有數(shù)據(jù)輸入SPSS11.5統(tǒng)計(jì)軟件包，研究數(shù)據(jù)中計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（(?)±S）表示。兩樣本均數(shù)比較使用LSD-t檢驗(yàn)，多個樣本均數(shù)比較先進(jìn)行正態(tài)檢驗(yàn)、方差齊性檢驗(yàn)。符合正態(tài)檢驗(yàn)和方差齊性，進(jìn)行單因素方差分析，組間兩兩比較用q檢驗(yàn)；p＜0.05表示差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。
　　 結(jié)果：1、各組大鼠血液SOD活力：與N組大鼠血液SOD活力（188.80±1.11）相比，H組大鼠（160.24±1.75）明顯下

8、降(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組大鼠心肌組織SOD活力分別為（170.02±2.58）、（179.37±1.01）、（187.19±0.49），均較H組增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組心肌組織SOD活力逐漸增強(qiáng)，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 2、各組大鼠血液MDA含量：與N組大鼠血液MDA含量（6.23±0.06）相比，H組大鼠（8.35±0.09）明顯增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、

9、T2組、T3組大鼠心肌組織MDA含量分別為（7.78±0.08）、（7.21±0.07）、（6.82±0.11），均較H組下降(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組心肌組織MDA含量逐漸降低，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 3、各組大鼠血液NO含量：與N組大鼠血液NO含量（46.52±0.68）相比，H組大鼠（25.36±0.66）明顯下降(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組大鼠心肌組織NO含量分別為

10、（31.47±0.44）、（35.47±0.43）、（41.28±0.52），均較H組增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組心肌組織NO含量逐漸增強(qiáng)，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)4各組大鼠血液ET-1的表達(dá)：與N組（64.10±0.41）相比，H組大鼠血液ET-1的表達(dá)（89.83±0.96）增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組的心肌組織ET-1的表達(dá)分別為（81.28±0.57）、（76.28±0.52）

11、、（70.63±0.60），均較H組降低(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組心肌組織ET-1的表達(dá)逐漸降低，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 5、各組大鼠心肌組織SOD活力：與N組大鼠心肌組織SOD活力（132.61±3.29）相比，H組大鼠（90.72±3.86）明顯下降(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組大鼠心肌組織SOD活力分別為（99.13±4.54）、（108.83±4.12）、（125.7

12、1±3.79），均較H組增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組心肌組織SOD活力逐漸增強(qiáng)，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 6、各組大鼠心肌組織MDA含量：與N組大鼠心肌組織MDA含量（1.59±0.20）相比，H組大鼠（2.37±0.21）明顯增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組大鼠心肌組織MDA含量分別為（2.06±0.15）、（1.82±0.19）、（1.67±0.15），均較H組下降(p

13、＜0.05)。T1組、T2組、T3組心肌組織MDA含量逐漸降低，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 7、各組大鼠心肌組織NO含量：與N組大鼠心肌組織NO含量（0.72±0.06）相比，H組大鼠（0.47±0.06）明顯下降(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組大鼠心肌組織NO含量分別為（0.52±0.05）、（0.61±0.02）、（0.71±0.05），均較H組增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組心

14、肌組織NO含量逐漸增強(qiáng)，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 8、各組大鼠心肌組織ET-1的表達(dá)：免疫組化結(jié)果顯示ET-1抗體主要在大鼠心肌組織細(xì)胞漿內(nèi)表達(dá)。與N組（1.61±0.06）相比，H組大鼠心肌組織ET-1的表達(dá)（7.69±0.18）增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組的心肌組織ET-1的表達(dá)分別為（4.74±0.13）、（4.04±0.20）、（3.54±0.17），均較H組降低(p＜0.05

15、)。T1組、T2組、T3組心肌組織ET-1的表達(dá)逐漸降低，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 9、各組大鼠心肌組織SODmRNA的表達(dá)：PCR結(jié)果顯示與N組大鼠SODmRNA的表達(dá)（0.77±0.06）相比，H組大鼠（0.58±0.04）明顯下降(p＜0.05)。T1組、T2組、T3組大鼠分別為（0.91±0.03）、（1.11±0.02）、（1.33±0.02），均較H組增強(qiáng)(p＜0.05)。T1組、T2組、

16、T3組心肌組織SODmRNA的表達(dá)逐漸增強(qiáng)，表達(dá)差異在各組間有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)。
　　 10、各組大鼠體重、收縮壓水平：各組間體重?zé)o統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＞0.05)。給藥前，N組大鼠收縮壓（108.07±2.11），H組、T1組、T2組、T3組大鼠收縮壓與N組大鼠收縮壓比較，差別均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，四組之間差別無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＞0.05)。
　　 結(jié)論：1、通過檢測SHR大鼠血液及心肌組織中氧化應(yīng)激指標(biāo)和

17、內(nèi)皮功能指標(biāo)的變化，提示SHR大鼠存在著氧化應(yīng)激反應(yīng)的增強(qiáng)和血管內(nèi)皮功能損害，血管內(nèi)皮功能損害與血管中過氧化物增多、抗氧化活動減弱、氧化應(yīng)激增強(qiáng)有關(guān)，提示氧化應(yīng)激反應(yīng)造成內(nèi)皮功能損害至少部分參與了高血壓的發(fā)生發(fā)展；2、經(jīng)瑞舒伐他汀干預(yù)后SHR大鼠心肌組織及血液中ET、MDA水平明顯下降，NO、SOD水平顯著升高，提示瑞舒伐他汀可以改善高血壓患者內(nèi)皮功能。其機(jī)制可能為瑞舒伐他汀減少超氧化物產(chǎn)生，降低脂質(zhì)過氧化及氧化應(yīng)激反應(yīng)，從而減少了對血

18、管內(nèi)皮的損傷；3、經(jīng)瑞舒伐他汀干預(yù)后SHR大鼠心肌組織SODmRNA的表達(dá)升高，提示內(nèi)源性SOD誘導(dǎo)發(fā)生在基因轉(zhuǎn)錄和翻譯水平，一般情況下，機(jī)體SOD基因的啟動子并沒有完全開放，當(dāng)受到藥物誘導(dǎo)時，未開放的SOD基因啟動子處于開放狀態(tài)，從而導(dǎo)致SODmRNA表達(dá)增強(qiáng)，同時表現(xiàn)在翻譯水平上，SOD活力增加；4、瑞舒伐他汀干預(yù)后SHR大鼠的血壓降低，其機(jī)制可能與其降低氧化應(yīng)激、改善內(nèi)皮功能有關(guān)；5、不同劑量的瑞舒伐他汀干預(yù)產(chǎn)生的效應(yīng)不同，提示瑞