人胃癌側(cè)群細胞分選與生物學(xué)特性鑒定.pdf

1、第一部分人胃癌側(cè)群細胞檢測分選與干細胞基因表型分析
　　[目的]檢測和分選胃癌細胞株中的SP細胞，并分析其干細胞相關(guān)基因表達情況。
　　[方法]選擇4株不同分化程度的人胃癌細胞系MKN-28、SGC-7901、BGC-823和AGS，以Hoechst33342/碘化丙啶熒光染料雙染，維拉帕米拮抗對照，應(yīng)用流式細胞儀熒光激活分選法檢測SP細胞比例并進行分選；RT-PCR比較分選所得的SP細胞和nonSP細胞中藥物轉(zhuǎn)運蛋白ABC

2、G2、干細胞膜蛋白表型CD133、CD24、CD44和干細胞信號通路相關(guān)調(diào)控基因OCT-4、NOTCH、NANOG、BMI-1的表達差異。
　　[結(jié)果]胃癌細胞MKN-28、SGC7901和BGC-823中SP細胞比例分別為0.46％-2.7％、1.89％-2.33％和1.00％-3.55％；胃癌細胞AGS中未能檢測出SP細胞。半定量PCR結(jié)果顯示，SP細胞中ABCG2的表達量明顯高于nonSP細胞；實時熒光定量PCR結(jié)果進一步顯

3、示，側(cè)群細胞中ABCG2約為非側(cè)群細胞中的8倍。干細胞膜蛋白表型CD24和CD44在胃癌SP細胞中的表達強于nonSP細胞；干細胞信號通路相關(guān)調(diào)控基因OCT-4、NOTCH、NANOG在SP細胞中的表達強于nonSP細胞；CD133、BMI-1基因在SP和nonSP細胞中的表達無差異。
　　[結(jié)論]側(cè)群細胞可在胃癌細胞中被檢測和分選，但并非所有的胃癌細胞株中均含有側(cè)群細胞。胃癌側(cè)群細胞高度表達藥物轉(zhuǎn)運蛋白ABCG2、干細胞膜蛋白表

4、型CD44、CD24和干細胞調(diào)控基因OCT-4、NANOG、NOTCH。
　　第二部分人胃癌側(cè)群細胞生物學(xué)特性鑒定
　　[目的]系統(tǒng)分析胃癌SP細胞體內(nèi)外增殖活力、成瘤能力、侵襲力等基本生物學(xué)特性。
　　[方法]通過細胞生長曲線(CCK-8法)、平板克隆形成試驗比較胃癌SP與nonSP細胞體外增殖活力；應(yīng)用細胞侵襲transwell試驗比較胃癌SP與nonSP細胞侵襲力差異；應(yīng)用異種移植Nod/SCID小鼠成瘤實驗比較

5、胃癌SP與nonSP細胞體內(nèi)致瘤能力差異；通過胃癌SP細胞體外培養(yǎng)比例回歸和體內(nèi)成瘤細胞分化現(xiàn)象觀察鑒定其不對稱分裂和多向分化特性。
　　[結(jié)果]細胞生長曲線實驗顯示，僅胃癌MKN-28細胞株SP細胞增殖活力明顯強于nonSP細胞，而BGC-823和SGC-7901細胞株來源的SP與nonSP細胞總體生長曲線差別未能無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。平板克隆實驗結(jié)果顯示，胃癌細胞株MKN-28、BGC-823和SGC-7901中SP細

6、胞克隆形成率均高于nonSP細胞，其中MKN-28 SP細胞克隆形成能力明顯高于nonSP細胞(P<0.05)。胃癌nonSP細胞侵襲力明顯強于SP細胞(P<0.05)。異種移植瘤實驗結(jié)果顯示，Nod/SCID小鼠體內(nèi)胃癌SP與nonSP細胞成瘤能力相仿(P>0.05)。胃癌SP細胞體外培養(yǎng)后，其中SP比例由起始的100％下降至1.0％，nonSP細胞中SP比例由起始的0％增加到0.3％；胃癌SP與nonSP細胞在體內(nèi)成瘤后，均可轉(zhuǎn)化成

7、不同分化程度的胃癌細胞。
　　[結(jié)論]胃癌SP細胞體外增殖活力、體內(nèi)成瘤和分化能力nonSP細胞相仿，SP細胞富集胃癌干細胞的依據(jù)不足。胃癌SP細胞侵襲能力較弱，胃癌細胞侵襲力可能主要與nonSP細胞有關(guān)。
　　第三部分人胃癌側(cè)群細胞化療藥物耐受性的相關(guān)分析
　　[目的]研究胃癌SP與nonSP細胞對化療藥物的耐受性差異，并對其表達腫瘤耐藥相關(guān)基因情況進行分析。
　　[方法]通過CCK-8法檢測比較胃癌SP與no

8、nSP細胞對于化療藥物5-FU和DDP的耐受性差異；應(yīng)用腫瘤化療耐藥相關(guān)的功能基因芯片，對胃癌SP與nonSP細胞中表達腫瘤耐藥相關(guān)基因情況進行比較分析
　　[結(jié)果]化療藥物5-Fu對胃癌細胞株SGC7901來源的SP的半效抑制濃度IC50為0.3346mg/ml，明顯高于nonSP細胞的0.0142mg/ml(P<0.05)；化療藥物DDP對胃癌SP的半效抑制濃度IC50為0.0055 mg/ml，亦明顯高于nonSP細胞的0.

9、0032mg/ml(P<0.05)。結(jié)果顯示胃癌SP細胞對化療藥物5-FU和DDP的耐受性明顯強于nonSP細胞。功能基因芯片結(jié)果顯示，在84個常見的腫瘤化療耐藥相關(guān)基因中，1個基因在胃癌SP細胞中表達低于nonSP細胞；15個基因在胃癌SP細胞中表達高于nonSP細胞，其中ABCB1、ABCG2、BAX、MYC、GSTP1、AR等6個基因的表達差異顯著(P<0.05)。
　　[結(jié)論]胃癌SP細胞對化療藥物的耐受性明顯強于胃癌no