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文檔簡介
1、背景與目的:
淋巴瘤是一類起源于淋巴造血系統(tǒng)的惡性腫瘤,主要侵犯淋巴結(jié)或結(jié)外淋巴器官。根據(jù)病理學(xué)、遺傳學(xué)、免疫學(xué)和臨床特點(diǎn)的不同,分為霍奇金淋巴瘤(Hodgkins lymphoma,HL)與非霍奇金淋巴瘤(non-Hodgkins lymphoma,NHL)。NK/T細(xì)胞淋巴瘤(NK/T cell lymphoma,NKTCL)約占NHL的10%,在亞洲人群中發(fā)病率較高,在我國更為多見,占全部淋巴瘤的21.38%。主要侵犯鼻
2、腔、鼻咽、鼻竇、皮膚、睪丸、骨髓等器官,部分病患伴發(fā)B癥狀,例如消瘦、盜汗、發(fā)熱等。該疾病惡性程度高,病程兇險,臨床進(jìn)展快,易復(fù)發(fā)與耐藥,預(yù)后極差。因此,在近年的腫瘤相關(guān)研究中,多藥耐藥的研究成為淋巴瘤治療一個熱點(diǎn)。
側(cè)群(Side population,SP)細(xì)胞是由Goodell在分離骨髓干細(xì)胞時,發(fā)現(xiàn)居于多數(shù)細(xì)胞一側(cè)的少量細(xì)胞具有多向分化、無限增殖及自我更新等生物學(xué)特性。腫瘤細(xì)胞中的SP細(xì)胞不僅具有上述生物學(xué)特性,而且比
3、非SP細(xì)胞具有更強(qiáng)的成瘤能力、侵襲能力及耐藥性。NKTCL臨床治療效果差與細(xì)胞表達(dá)多藥耐藥(multidrug resistance,MDR)基因密切相關(guān),這些基因?qū)е履[瘤細(xì)胞對化療藥物敏感性下降,造成腫瘤的耐藥與復(fù)發(fā)。MDR基因多為ATP結(jié)合盒式蛋白(ATP-binding cassette,ABC)轉(zhuǎn)運(yùn)體家族成員,它們以ATP依賴的、主動運(yùn)輸?shù)姆绞綄⒓?xì)胞內(nèi)的底物轉(zhuǎn)運(yùn)出細(xì)胞,限制細(xì)胞內(nèi)底物濃度,與腫瘤細(xì)胞多藥耐藥性相關(guān)。因此,本研究擬
4、通過分選NK/T細(xì)胞淋巴瘤耐藥株中的SP細(xì)胞,并研究其生物學(xué)特性以及ABCG2蛋白和RNA的表達(dá)情況,探索NKTCL多藥耐藥的相關(guān)機(jī)制。
方法:
構(gòu)建NK/T細(xì)胞淋巴瘤細(xì)胞系SNK-6耐阿霉素細(xì)胞株SNK-6/ADM,并檢測其多藥耐藥性。分選SNK-6/ADM細(xì)胞株中的側(cè)群細(xì)胞SNK-6/ADM-SP,并通過CCK8法、流式細(xì)胞術(shù)檢測SNK-6/ADM-SP的增殖、細(xì)胞周期、細(xì)胞表面分子標(biāo)志物和多藥耐藥等生物學(xué)特性。
5、并通過Real Time-PCR、Western Blot技術(shù)測定SNK-6/ADM-SP細(xì)胞中的ABC相關(guān)基因及蛋白的表達(dá)情況。
結(jié)果:
1、SNK-6/ADM的耐藥指數(shù)(Resistance Index,RI)=5.158。SNK-6和SNK-6/ADM對吉西他濱、阿霉素、順鉑、培門冬酶的半數(shù)抑制率(Inhibition of concentration50%,IC50)分別為0.076±0.016、0.067±
6、0.00,57.268±0.225、37.49±0.639,5.19±0.541、23.63±1.157,4.569±0.652、5.338±0.403。
2、SNK-6/ADM-SP細(xì)胞株對吉西他濱、阿霉素、順鉑、培門冬酶的IC50值分別為0.089±0.014、63.55±1.847、61.09±1.502、5.534±0.207。SNK-6/ADM-SP增殖和凋亡速度較慢(p<0.05);G0/G1比例為(63.3±2.
7、4)%,G2/M比例為(6.377±0.578)%,S期比例為(30.333±1.856)%;表達(dá)CD56+, CD16-,CD34-和 CD117-的細(xì)胞群體比例與SNK-6、SNK-6/ADM相似。
4、SNK-6/ADM-SP細(xì)胞系較SNK-6、SNK-6/ADM細(xì)胞系高表達(dá)ABCG2 mRNA和蛋白(p<0.05)。
結(jié)論:
1、NK/T細(xì)胞淋巴瘤多藥耐藥細(xì)胞系側(cè)群細(xì)胞是一類成熟NK/T細(xì)胞、多藥耐
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