補體C3對失血性休克相關(guān)病理生理調(diào)控機制的研究.pdf

1、目的：據(jù)統(tǒng)計有1/3的創(chuàng)傷所致死亡是由失血性休克引起，盡管目前關(guān)于失血性休克病理生理機制的研究已有很多，但難以避免的急性失血性休克后繼機體級聯(lián)損傷的存在，使人們意識到其生理病理機制仍需要進一步探索完善，藉此尋找新的有效藥物靶標和診斷治療手段。本研究應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)高通量技術(shù)篩選創(chuàng)傷性休克的特異性蛋白，探討失血性休克特異性蛋白C3在失血性休克中的作用機制，以進一步闡明失血性休克病理生理機制，尋找檢測失血性休克進展和機體損傷程度的有效指標，探

2、索改善預(yù)后的有效治療標靶。
　　方法：采用頸動脈放血法建立大鼠失血性休克模型，記錄血壓、心率等血流動力學(xué)指標，留取血漿和肝臟樣本。應(yīng)用雙向電泳和質(zhì)譜技術(shù)篩選分析失血性休克血漿差異蛋白。應(yīng)用ELISA驗證差異蛋白在失血性休克大鼠血漿中的表達情況。通過ELISA、Western blot、免疫組化、免疫熒光、HE染色法檢測C3在失血性休克大鼠體內(nèi)的表達分布；通過ELISA、NBT法、化學(xué)方法等技術(shù)檢測C3耗竭的失血性休克模型血漿中AL

3、T、AST、SOD、MDA、MT-1、NO和血管中CX43的表達水平，與血漿中C3表達水平比較，分析C3對失血性休克后血管舒縮性反應(yīng)性、血管通透性、機體氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)和肝臟、血管損傷的影響。進一步在同等條件下，給予失血性休克大鼠注入sCR1抑制C3激活，ELISA檢測上述指標，MPO法檢測肝臟中白細胞浸潤程度，石蠟切片HE染色法和TUNEL實驗觀察肝臟和血管損傷凋亡情況，以評估C3抑制后對血管舒縮性反應(yīng)性、血管通透性、機體氧化應(yīng)激、

4、炎癥反應(yīng)和組織器官損傷的影響。
　　結(jié)果：（1）失血性血漿蛋白質(zhì)組學(xué)篩選共發(fā)現(xiàn)10個有意義差異蛋白點，鑒定出6個高表達蛋白（α-白蛋白、補體C3、血色素結(jié)合蛋白、纖維蛋白原γ鏈、F2凝血酶、角蛋白1）和2個低表達蛋白（酪氨酸激酶受體A5亞基1、角蛋白6A）。發(fā)現(xiàn)大鼠發(fā)生失血性休克時，血漿中α-白蛋白、補體C3、血色素結(jié)合蛋白、凝血酶 F2明顯高表達（P<0.05）。（2）失血性休克發(fā)生時補體C3在肝臟和大血管組織的表達含量明顯升高

5、；廣泛分布位于肝臟和血管內(nèi)皮細胞中；在肝細胞和內(nèi)皮細胞的胞漿中均勻分布，在肝細胞胞核中大量聚集；肝臟和血管的可見明顯形態(tài)學(xué)學(xué)損傷。（3）C3在血漿中的表達含量與IL-6、TNF-α、MDA、ALT、AST、NO、ET-1呈正相關(guān)，與SOD、CX43與C3呈負相關(guān)；其中C3與NO、ET-1、CX43、ALT、IL-6具有強相關(guān)性，與SOD、MDA、AST具有中度相關(guān)性。（4）失血性休克后，應(yīng)用sCR1抑制C3激活干預(yù)液體復(fù)蘇后心率和平均動

6、脈壓在10min內(nèi)快速恢復(fù)正常，且在復(fù)蘇后一直較平穩(wěn)，其心率明顯較HS組、HS+Saline組低（P<0.05）；平均動脈壓在液體復(fù)蘇后基本接近正常對照組水平。血漿中的IL-6、TNF-α、MDA、ALT、AST、NO、ET-1水平明顯低于單純生理鹽水復(fù)蘇組，SOD水平較之升高；肝臟白細胞浸潤顯著減少，細胞凋亡明顯減少，肝臟和血管形態(tài)學(xué)損傷同樣明顯減少。
　　結(jié)論：本研究成功篩選出一批失血性休克的差異表達蛋白，明確了其在外周血中的

7、含量情況，明確了C3在失血性休克機體中的表達分布情況，初步闡明了C3作為一種急性期反應(yīng)蛋白在失血性休克中的作用機制，明確C3在失血性休克時參與血流動力學(xué)、血管舒縮反應(yīng)性、血管通透性、氧化應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、組織器官損傷等多項機體反應(yīng)。證實了通過sCR1抑制C3在失血性休克早期的活化，可以穩(wěn)定休克后的血壓、心率等血流動力學(xué)，改善血管舒縮反應(yīng)性，提高休克后血管的反應(yīng)性，降低血管通透性，有效削弱機體在失血性休克后的過度炎癥反應(yīng)，減弱機體氧化應(yīng)激。