Rbm24對心肌相關(guān)基因的調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的：
　　研究在心肌細(xì)胞分化和發(fā)育過程中，Rbm24蛋白發(fā)揮功能和產(chǎn)生的影響。尋找Rbm24結(jié)合的相關(guān)基因的不同水平的RNA，以及結(jié)合目的RNA后所發(fā)揮的功能，為降低Rbm24的表達(dá)導(dǎo)致擴(kuò)張性心肌病等一系列心肌受損和功能紊亂相關(guān)疾病探究原因，尋找相關(guān)的信號通路，提供一定的實驗及理論依據(jù)，為成功解決心臟疾病難題尋找重要的攻克點。
　　方法：
　　通過Western blot免疫印跡檢測Rbm24和其他心肌相關(guān)蛋白在C2

2、C12細(xì)胞分化中蛋白的表達(dá)情況，并用western blot免疫印跡法來觀察各種心肌細(xì)胞系中Rbm24的蛋白水平表達(dá)情況，通過在心肌細(xì)胞中用siRNA干擾技術(shù)在在心肌細(xì)胞中敲低Rbm24，觀察敲低后的心肌細(xì)胞結(jié)構(gòu)和功能的變化及影響。構(gòu)建Rbm24的過表達(dá)細(xì)胞系，利用rip-chip技術(shù)尋找Rbm24結(jié)合的靶基因mRNA，并用熒光素酶報告系統(tǒng)和GFP報告系統(tǒng)進(jìn)行尋求Rbm24的結(jié)合區(qū)域。
　　結(jié)果：
　　在C2C12分化的過程

3、中，Rbm24和一些心肌結(jié)構(gòu)蛋白如ACTN2和TNNT2開始表達(dá)，在小鼠心肌細(xì)胞HL1中，我們敲低Rbm24后發(fā)現(xiàn)ACTN2和TNNT2表達(dá)量都有降低，并在H9C2中過表達(dá)Rbm24利用RIP-chip技術(shù)進(jìn)一步驗證了Rbm24蛋白的靶基因Chrm2，同時，在心肌細(xì)胞中敲低Rbm24后，Chrm2 mRNA表達(dá)上升。我們還通過GFP報告基因系統(tǒng)和熒光素酶報告基因系統(tǒng)找出Rbm24蛋白結(jié)合在Chrm2 mRNA分子的CDS區(qū)的大致區(qū)域。<