細(xì)菌生物被膜耐藥及形成相關(guān)基因調(diào)控機(jī)制的研究.pdf

1、目的：東方田鼠抗日本血吸蟲(chóng)相關(guān)基因KPNA2重組逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建和病毒制備研究機(jī)械通氣患者氣管導(dǎo)管細(xì)菌生物被膜的病原學(xué)分布,通過(guò)生物被膜菌與相應(yīng)浮游菌在體外培養(yǎng)的藥敏試驗(yàn)進(jìn)行比較,進(jìn)而探討細(xì)菌生物被膜對(duì)抗生素的耐藥性。進(jìn)一步以臨床分離的表皮葡萄球菌生物被膜菌和對(duì)應(yīng)的浮游菌為研究對(duì)象,探討表皮葡萄球菌生物被膜形成相關(guān)的基因(操縱子—icaA基因,轉(zhuǎn)錄調(diào)控子—sigB基因,操縱子調(diào)節(jié)基因—icaR基因,毒力因子調(diào)節(jié)系統(tǒng)—agrA基因)的

2、分布及與生物被膜形成的關(guān)系。
　　 方法：
　　 (1)研究了110例施行人工氣道(氣管插管和氣管切開(kāi))并機(jī)械通氣的患者拔除的氣管導(dǎo)管,用剛果紅培養(yǎng)基篩選出生物被膜菌株和相應(yīng)的浮游菌株,并對(duì)生物被膜菌進(jìn)行半定量檢測(cè),藥敏實(shí)驗(yàn)分析生物被膜菌株和相應(yīng)的浮游菌在普通洲培養(yǎng)基上耐藥差異以及生物被膜陽(yáng)性菌在泊洛沙姆(Poloxamer,F-127)培養(yǎng)基和普通姍培養(yǎng)基上耐藥性差異進(jìn)行分析。
　　 (2)收集氣管導(dǎo)管中分離的

3、表皮葡萄球菌,按生物被膜陽(yáng)性表皮葡萄球菌及相應(yīng)的浮游菌表皮葡萄球菌分為2組。使用RT-PCR分別對(duì)生物被膜菌組和浮游菌組細(xì)菌的icaA、sigB、icaR、agzA基因輝度比進(jìn)行檢測(cè);利用Real-time PCR分別檢測(cè)生物被膜菌組和浮游菌組細(xì)菌的icaA、sigB、icaR、agrA四種與生物被膜形成相關(guān)的基因的表達(dá),并通過(guò)2-△△Ct方法進(jìn)行相對(duì)定量。分析表皮葡萄球菌臨床菌株中icaA、sigB、icaR、agrA基因轉(zhuǎn)錄水平與表

4、皮葡萄球菌生物被膜形成的相關(guān)性。
　　 結(jié)果：
　　 (1)110例機(jī)械通氣患者氣管導(dǎo)管中篩選出生物被膜陽(yáng)性菌61株,陽(yáng)性率為55.45％。以葡萄球菌屬,糞腸球菌及銅綠假單胞菌最常見(jiàn),生物被膜菌株與相應(yīng)浮游菌株在普通MH培養(yǎng)基上藥敏結(jié)果相似,差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05);生物被膜菌株在普通MH培養(yǎng)基上和在Poloxamer培養(yǎng)基上藥敏結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05),且后者耐藥性更強(qiáng)。
　　 (2)RT-

5、PCR中icaA、sigB、icaR、agrA基因的輝度測(cè)定值統(tǒng)計(jì)分析結(jié)果顯示生物被膜陽(yáng)性表皮葡萄球菌及相應(yīng)的浮游菌表皮葡萄球菌兩組細(xì)菌間差異無(wú)顯著性(P＞0.05),但icaA、sjgB基因生物被膜菌組平均秩及秩和明顯高于浮游菌組;而icaR、agrA基因生物被膜菌組平均秩及秩和明顯小于浮游菌組。
　　 (3)Real-time PCR檢測(cè)顯示表皮葡萄球菌生物被膜菌組icaA,sigB基因表達(dá)量分別是浮游菌組的418.8倍與8

6、1倍,而icaR,agrA基因在生物被膜菌組中表達(dá)量?jī)H為浮游菌組的1/145與1/270。
　　 結(jié)論：
　　 (1)本院機(jī)械通氣患者氣管導(dǎo)管生物被膜病原學(xué)分布以葡萄球菌屬,糞腸球菌和銅綠假單胞菌為主,生物被膜菌與浮游菌在普通MH培養(yǎng)基上耐藥性分析未見(jiàn)明顯差異,生物被膜菌在Poloxamer培養(yǎng)基上和在MH培養(yǎng)基上耐藥性有明顯差異,推測(cè)Poloxamer培養(yǎng)基有可能反映生物被膜菌較真實(shí)的對(duì)藥物的耐受情況,其耐受性更強(qiáng)。<