鴨Rbm24-38基因克隆、組織表達及MyoD對其調(diào)控作用研究.pdf

1、RNA結(jié)合蛋白Rbm24和Rbm38是具有RNA識別結(jié)構(gòu)域(RRM)的一類蛋白，能夠識別并結(jié)合下游靶基因3'非編碼區(qū)AU(3'-UTR)富集序列，從而發(fā)揮出多種生理功能。Rbm24與Rbm38均在成年鼠的心肌和骨骼肌中具有較高的表達量，且Rbm24對心肌細胞的生長發(fā)育以及心臟的收縮發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用。本試驗通過克隆鴨Rbm24和Rbm38基因，從基因序列及在骨骼肌中的表達模式分析其功能，并過表達Rbm24和Rbm38的上游基因MyoD后

2、，從細胞水平探討了Rbm24和Rbm38基因在成肌細胞增殖分化中的作用。主要研究結(jié)果如下:
　　1、獲得了鴨Rbm24和Rbm38基因序列，Rbm24基因測序全長為678bp，編碼226個氨基酸，鴨Rbm38基因測序全長為648bp，編碼216個氨基酸，鴨Rbm24與Rbm38基因序列中均包含有起始密碼子和終止密碼子在內(nèi)的完整開放閱讀框(ORF)。
　　2、鴨Rbm24基因與原雞的同源性最高（核苷酸同源性為94.1％，氨基酸

3、同源性為98.7％），其次是山雀、非洲爪蛙、豬、人、猩猩、老鼠、牛。鴨Rbm38基因與山雀的同源性最高（核苷酸同源性為96.1％，氨基酸同源性為99.1％），其次是雞、非洲爪蛙、豬、人、猩猩、老鼠、牛。
　　3、鴨Rbm24分子進化樹共分為鳥類、哺乳類、爬行類三枝，其中與鳥類關(guān)系最近，且與爬行類的關(guān)系最遠。鴨Rbm38進化樹同樣分化為鳥類、哺乳類、爬行類三枝，其中與鳥類關(guān)系最近，但與哺乳動物的關(guān)系最遠。
　　4、鴨Rbm24

4、與Rbm38基因均含有一個保守的RRM結(jié)構(gòu)域，由78個氨基酸組成。RRM結(jié)構(gòu)域中的氨基酸高度保守，而結(jié)構(gòu)域兩端的氨基酸序列保守性相對較低。兩基因均含有兩個結(jié)合RNA所必需的高度保守的亞基序(RNP1和RNP2)，兩個亞基序列分別由8個氨基酸和6個氨基酸組成。
　　5、從胚胎期15日齡到出生后6周齡，Rbm24基因和Rbm38基因在腿肌均有表達。Rbm24基因存在兩個表達高峰，分別是胚胎期28日齡和出生后第5周齡;Rbm38只存在一

5、個峰值，即在出生后第5周齡。胸肌中，Rbm24基因和Rbm38基因均有表達。Rbm24基因存在胚胎期28日齡和出生后第6周齡兩個表達高峰，Rbm38基因只存在第6周齡一個表達高峰。
　　6、構(gòu)建了真核表達載體pEGFP-N1-MyoD并成功轉(zhuǎn)入到鴨成肌細胞。轉(zhuǎn)染12h、24h、36h后，MyoD均有表達，且在轉(zhuǎn)染后24h后表達量達到最大。過表達MyoD后，鴨成肌細胞的數(shù)目顯著增多，Rbm24和Rbm38基因的表達量顯著增高，表明過