反復(fù)降調(diào)節(jié)E2高水平患者的IVF結(jié)局及卵巢microRNA表達(dá)圖譜的研究.pdf

1、【背景】
　　基礎(chǔ)E2被視為評(píng)價(jià)卵巢儲(chǔ)備能力的指標(biāo)之一，卵巢功能減退早期E2可先于FSH一年表現(xiàn)為水平升高，臨床常被作為預(yù)測(cè)控制性超促排卵（COH）中卵巢反應(yīng)的參考。然而在臨床實(shí)踐中會(huì)遇到一些基礎(chǔ)E2高水平，且經(jīng)反復(fù)降調(diào)節(jié)后仍不能達(dá)到降調(diào)節(jié)標(biāo)準(zhǔn)的患者。卵巢是人體合成E2的主要器官，卵巢承載著女性生殖內(nèi)分泌的主要器官。而 microRNA（miRNA）作為真核生物體內(nèi)重要的小 RNA調(diào)控分子，廣泛參與女性卵泡生長(zhǎng)、發(fā)育成熟、受精、著

2、床及早期胚胎發(fā)育等過(guò)程，從而對(duì)維持女性正常生育功能起到至關(guān)重要的作用。
　　【目的】
　　對(duì)6例基礎(chǔ)雌二醇（E2）高水平且經(jīng)反復(fù)降調(diào)后E2不達(dá)標(biāo)患者的臨床資料進(jìn)行回顧性分析，以探討其病因、治療措施及助孕效果。繪制人類卵巢miRNA的表達(dá)圖譜，描繪miRNA在卵巢生理過(guò)程，探索miRNA如何參與生物合成及調(diào)控的過(guò)程，進(jìn)而為進(jìn)一步對(duì)miRNA的科學(xué)研究及臨床實(shí)踐提供參考及思路。
　　【方法】
　?。?）臨床資料的回顧

3、性分析回顧性分析2012年1月至2014年8月間于我生殖醫(yī)學(xué)中心行IVF治療患者中基礎(chǔ)E2水平升高的267例患者的IVF臨床資料，其中6例行長(zhǎng)效長(zhǎng)方案反復(fù)降調(diào)節(jié)E2水平難以達(dá)到降調(diào)標(biāo)準(zhǔn)。將同期我中心行長(zhǎng)方案助孕的患者的臨床結(jié)局進(jìn)行比較研究。
　?。?）人類卵巢miRNA的實(shí)驗(yàn)研究
　　1）收集正常人的卵巢皮質(zhì)區(qū)組織，并制備皮質(zhì)區(qū)組織細(xì)胞小RNA cDNA文庫(kù)，利用Illumina測(cè)序技術(shù)和CPSS工具對(duì)小RNA進(jìn)行深度測(cè)序和

4、數(shù)據(jù)分析。
　　2）繪制卵巢皮質(zhì)區(qū)組織細(xì)胞 miRNA的表達(dá)圖譜（包括新發(fā)現(xiàn)的miRNA即novel miRNA）。
　　3）利用生物信息學(xué)軟件對(duì)高表達(dá)的前十位miRNA的下游靶基因進(jìn)行預(yù)測(cè)，進(jìn)而運(yùn)用Gene Ontology（GO）、Pathway analysis等軟件對(duì)其潛在的下游調(diào)控通路進(jìn)行富集和篩選。
　　4）在預(yù)測(cè)和篩選的基礎(chǔ)上，運(yùn)用實(shí)時(shí)定量RT-PCR對(duì)前十位高表達(dá)的miRNA及novel miRNA及其

5、下游靶標(biāo)進(jìn)行實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證。
　　【結(jié)果】
　　（1）臨床資料的回顧性分析基礎(chǔ)E2水平升高的267例中6例行長(zhǎng)效長(zhǎng)方案反復(fù)降調(diào)節(jié)E2水平難以達(dá)到降調(diào)標(biāo)準(zhǔn)患者，其中4例直接超排者2例獲得臨床妊娠；1例改行微刺激方案者，獲得臨床妊娠；1例改行來(lái)曲唑（LE）繼續(xù)治療后行促排治療者，獲得臨床妊娠。261例唯基礎(chǔ) E2高水平且垂體降調(diào)節(jié)達(dá)標(biāo)者的臨床妊娠率為35.29％（78/221），流產(chǎn)率7.69%(6/78)，OHSS發(fā)生率15.33%

6、(40/261)。同期行長(zhǎng)方案的患者臨床妊娠率49.72%，流產(chǎn)率9.82%，OHSS發(fā)生率2.79%。
　?。?）人類卵巢miRNA的實(shí)驗(yàn)研究
　　1）深度測(cè)序結(jié)果顯示，有762種已知miRNA和492種新發(fā)現(xiàn)的miRNA在正常人卵巢皮質(zhì)區(qū)組織細(xì)胞中表達(dá)。經(jīng)過(guò)qRT-PCR驗(yàn)證，前10條高表達(dá)的miRNA及novel miRNA的相對(duì)含量與測(cè)序結(jié)果相一致。
　　2）GO和Pathway分析發(fā)現(xiàn)，前10條高表達(dá)的miR