丹參注射液對SD大鼠退變椎間盤組織病理學的研究.pdf

1、目的：
　　1.①通過動物實驗探討折尾法持續(xù)牽張與椎間盤組織學改變的關(guān)系；②采用折尾法持續(xù)牽張力對椎間盤組織學改變的作用機理，為椎間盤退變模型的篩選提供一種較簡便的實驗?zāi)Ｐ汀?br>　　2.①研究并探討丹參注射液對退變椎間盤組織病理學改變的關(guān)系；②通過丹參注射液對SD大鼠退變椎間盤模型的實驗研究，來為臨床中藥活血化淤止痛法治療腰腿痛提供理論依據(jù)；③通過該實驗為進一步探索發(fā)掘預(yù)防及治療退變椎間盤，提供新的思路和方法。
　　方法

2、：
　　1.第一階段：選用36只SD大鼠為研究對象，將其隨機分為正常組12只（A1、A2組各6只）、造模組24只。造模組內(nèi)有又分：對照組12只（B1、B2組各6只）和實驗組12只（C1、C2組各6只）。正常組不作特殊處理，其余造模動物組均使用自制捆綁帶將鼠尾折成“U”型，在生理彎曲范圍內(nèi)，每日早晚2次，每次1-2小時。1~2個月后，每隔7天分批從2組：A1組和造模組（B1組、C1組）動物模型中選取2只，用1％氯胺酮50mg/kg腹

3、腔注射麻醉，將大鼠尾部消毒鋪無菌巾，距鼠尾根部1cm處切斷鼠尾并縫合傷口。同時，祛除鼠尾的皮膚及周圍粘連的韌帶等多余組織，再用生理鹽水沖洗干凈后，臵于4％中性福爾馬林固定溶液中浸泡固定，并在4℃冰箱保存24 h后，用鋒利的組織刀片切開尾部椎間盤，分別選取3-4個椎間盤組織做標本。然后，依次進行脫鈣，酒精遞度脫水，常規(guī)石蠟包埋，超薄切片機制備5μm組織切片，進行HE染色。光鏡及電鏡下組織學觀察，用以確定椎間盤退變模型造模是否成功。

4、　　2.第二階段：在第一階段確定椎間盤退變模型造模成功的基礎(chǔ)上展開。剩余正常組（A2組）不作特殊處理。剩余對照組（B2組）給予0.9%生理鹽水2ml灌胃處理；剩余實驗組（C2組）予丹參注射液2ml進行灌胃處理。1個月后，從3組（A2組、B2組、C2組）動物模型中每隔7天分批選取2只，分別用1%氯胺酮50mg/kg腹腔注射麻醉，將大鼠尾部消毒鋪無菌巾，距尾根部1cm處切斷鼠尾并縫合傷口，祛除鼠尾的皮膚和周圍的組織及粘連的韌帶等多余組織。用

5、生理鹽水沖洗干凈后，臵于4％中性福爾馬林固定溶液中浸泡固定，并在4℃冰箱保存24h后，用鋒利的組織刀片切開尾部椎間盤，分別選取3-4個椎間盤組織做標本。然后，依次進行脫鈣，酒精遞度脫水，常規(guī)石蠟包埋，超薄切片機制備5μm組織切片，HE染色后，光學顯微鏡及高倍電子顯微鏡下觀察髓核，纖維環(huán)組織改變。
　　結(jié)果：
　　1.第一階段：常規(guī)HE染色時，每個標本光鏡下至少觀察5個視野，纖維環(huán)外層組織嗜伊紅，呈紅色，內(nèi)層組織嗜堿性，呈紫色

6、；彈力纖維呈亮粉紅色，膠原纖維被伊紅染成淡粉紅色，軟骨細胞的細胞胞漿著色呈黑藍色。A1正常組：鏡下見椎間盤內(nèi)的細胞均勻分布，形態(tài)正常。椎間盤纖維環(huán)完整、包繞髓核，其纖維成致密板層狀排列，髓核居中(見圖A1，HE×100)。造模組（B1組與C1組）的結(jié)構(gòu)基本一致(見圖造模組，HE×100)。鏡下見：纖維環(huán)排列較雜亂，纖維腫脹或斷裂，甚至可見微小裂隙，在斷裂帶出現(xiàn)了大量的白細胞以及大片狀增生的膠原纖維，其中細胞增多；髓核細胞數(shù)量不斷減少，髓

7、核組織中有著少量髓核細胞，形態(tài)不規(guī)則，分布不均勻；纖維軟骨組織增生，排列紊亂；少數(shù)可見有血管翳的生長。
　　2.第二階段：常規(guī)HE染色時，每個標本光鏡下至少觀察5個視野，纖維環(huán)外層組織嗜伊紅，呈紅色，內(nèi)層組織嗜堿性，呈紫色；彈力纖維呈亮粉紅色，膠原纖維被伊紅染成淡粉紅色，軟骨細胞的細胞胞漿著色呈黑藍色。視野中有黑藍色細胞表達的計為軟骨細胞陽性表達（＋），未出現(xiàn)黑藍色細胞表達，計為軟骨細胞陰性表達（－）。A2正常組鏡下見椎間盤結(jié)構(gòu)基

8、本上與A1正常組一致(見圖A2，HE×100)，大部分標本軟骨細胞陰性表達（－）。B2對照組與B1對照組和C1實驗組的結(jié)構(gòu)基本一致，大部分標本軟骨細胞陽性表達（＋），同時有大片增生的膠原纖維，其中細胞逐漸增多。C2實驗組鏡下見：絕大多數(shù)標本軟骨細胞陽性表達（＋），增生的膠原纖維數(shù)量較 B組減少，有逐漸被消退的趨勢；局部還可以看到白細胞的浸潤，程度較 B組輕；纖維軟骨細胞逐漸增多，排列緊密；可見有較多的血管翳生長(見圖C2，HE×100)

9、。A1組～C2組軟骨細胞呈陽性表達的例數(shù)分別為0例、5例、5例、1例、5例、6例，所得數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。A1組和B1組比較：P=0.0034，P<0.05;A1組和C1組比較：P=0.0034；B1組和C1組比較：P=1.0000；A2組和B2組比較：P=0.0209，P<0.05;A2組和C2組比較：P=0.0005，P<0.05.均有統(tǒng)計學差異。
　　結(jié)論：
　　1.折尾法反復(fù)持續(xù)對SD大鼠鼠尾的牽張可引起椎間盤組織病