高氧暴露下A549細胞內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子的表達及胰島素樣生長因子-Ⅰ干預(yù)影響.pdf

1、目的：暴露在高氧條件下的肺組織會發(fā)生損傷，在這個過程中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激發(fā)揮了重要的作用，本次實驗研究IGF-Ⅰ對暴露在高氧條件下的A549細胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子CHOP、caspase-3表達以及細胞形態(tài)變化的影響。
　　方法：將復(fù)蘇、傳代培養(yǎng)的A549細胞株分為五組：Ⅰ組：正常空氣組，Ⅱ組:高氧暴露組，Ⅲ組：高氧+IGF-Ⅰ（1ng/ml）劑量組，Ⅳ組：高氧+IGF-Ⅰ（10ng/ml）劑量組，Ⅴ組：高氧+IGF-Ⅰ（100ng/m

2、l）劑量組。將接種于培養(yǎng)皿中的各組A549細胞，放入CO2恒溫細胞培養(yǎng)箱內(nèi)進行培養(yǎng)，待次日通過倒置顯微鏡觀察各組細胞動態(tài)生長狀況，當(dāng)細胞匯合至50％左右時，加入不同藥物濃度的IGF-Ⅰ進行干預(yù)。其中，Ⅰ組（正?？諝饨M）：將含有A549細胞的培養(yǎng)皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，并放入5%CO2、37℃細胞培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)；Ⅱ組（高氧暴露組）：將含有A549細胞的培養(yǎng)皿中加入含10％胎牛血清的DMEM培養(yǎng)液，先通入3L/min含5%C

3、O2、5%N2和90%氧氣的高氧混合氣體1h后,為維持高氧環(huán)境持續(xù)給予低流量的上述混合氣體，并置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h；藥物干預(yù)組：將經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ處理后的Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ組細胞與高氧組一樣的方法提供的高氧環(huán)境，置于37℃培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)24h；通過倒置顯微鏡觀察細胞凋亡、形態(tài)變化情況；采用MTT測定正常空氣組、高氧暴露組和不同濃度IGF-Ⅰ干預(yù)組間的細胞存活率；采用DAPI熒光染色觀察各組間的細胞核凋亡情況；應(yīng)用Western-blo

4、t檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激相關(guān)因子CHOP、Caspase-3的表達情況。
　　結(jié)果：倒置顯微鏡觀察細胞形態(tài)學(xué)顯示高氧暴露Ⅱ組與正常Ⅰ組相比存活的細胞明顯變少，細胞發(fā)生收縮變小、變圓，與周圍細胞分離等典型的凋亡現(xiàn)象；經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ處理后，細胞也出現(xiàn)了凋亡現(xiàn)象，但存活的細胞相對較多，以高氧+IGF-Ⅰ（100ng/ml）組最顯著。細胞存活率測定顯示各組間細胞的存活率有明顯不同，經(jīng)高氧處理后的細胞存活率低，而經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ干預(yù)后的A

5、549細胞的存活率呈增高趨勢，其中高氧+IGF-Ⅰ（100ng/ml）組細胞存活率最高。DAPI熒光染色結(jié)果表明高氧處理后經(jīng)熒光標(biāo)記出的細胞核較多，經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ處理后被熒光標(biāo)記細胞核逐漸減少，其中高氧+IGF-Ⅰ（100ng/ml）組差異顯著。Western-blot結(jié)果顯示CHOP、Caspase-3凋亡因子的表達在高氧組中顯著增加，經(jīng)不同劑量IGF-Ⅰ干預(yù)后，CHOP的表達均有減少，其中高氧+IGF-Ⅰ（100ng/ml）組

6、差異最明顯(P<0.01)；Caspase-3的表達均有減少趨勢，其中高氧+IGF-Ⅰ（100ng/ml）組差異最明顯(P<0.01)。
　　結(jié)論：
　　1、IGF-Ⅰ對暴露在高濃度的氧氣環(huán)境下的A549細胞具有保護作用；
　　2、IGF-Ⅰ有抑制A549細胞在高濃度的氧氣環(huán)境下凋亡的作用；不同劑量濃度IGF-Ⅰ在抑制凋亡時可能具有雙向作用，IGF-Ⅰ在100ng/ml劑量時抑制凋亡作用最強；
　　3、暴露在高濃