異體CD3AK細(xì)胞治療人腎癌SCID小鼠移植瘤模型的有效性研究.pdf

1、目的
　　腎細(xì)胞癌(Renalcellcarcinoma，RCC)占男性新發(fā)癌癥的4％，在女性新發(fā)癌癥病例中占3％，與其他實(shí)體腫瘤不同的是，腎癌對腫瘤的傳統(tǒng)療法均不敏感，如放射治療、化學(xué)治療等.但是腎癌被發(fā)現(xiàn)是免疫相關(guān)的腫瘤，多種免疫治療在腎癌的治療中取得了不同程度的成功。本實(shí)驗(yàn)通過研究過繼細(xì)胞免疫治療（Adoptivecellularimmunotherapy，ACI）:異體抗CD3分子的單克隆抗體激活的殺傷細(xì)胞(anti-CD

2、3monoclonalantibodyactivatedkillercells，CD3AK)對人腎癌細(xì)胞株OS-RC-2的體外殺傷作用，以及其對嚴(yán)重聯(lián)合免疫缺陷(severecombinedimmunodeficiency，SCID)小鼠人腎癌移植瘤模型的體內(nèi)抑制作用，從而進(jìn)一步探討異體CD3AK細(xì)胞對SCID小鼠人腎癌移植瘤治療的有效性，為異體CD3AK細(xì)胞治療腎癌的臨床應(yīng)用提供理論及實(shí)驗(yàn)支持。
　　方法
　　1.人腎癌O

3、S-RC-2細(xì)胞株的培養(yǎng)與傳代:無菌細(xì)胞培養(yǎng)，及時(shí)進(jìn)行換液與傳代，定時(shí)觀察細(xì)胞形態(tài)與數(shù)量，待細(xì)胞進(jìn)入對數(shù)生長期時(shí)，臺(tái)盼藍(lán)染色鑒定活力后用于實(shí)驗(yàn)。
　　2.于體外條件下建立大量擴(kuò)增異體CD3AK細(xì)胞的培養(yǎng)體系:采集健康志愿者的外周血，體外分離獲得外周血單個(gè)核細(xì)胞(peripheralbloodmononuclearcell，PBMC)，培養(yǎng)獲得異體CD3AK細(xì)胞;采用流式細(xì)胞儀檢測CD3AK細(xì)胞的表型;
　　3.CCK-8（C

4、ellCountingKit-8）法檢測異體CD3AK細(xì)胞對人腎癌OS-RC-2細(xì)胞株的殺傷作用;
　　4.建立荷瘤模型:采用左側(cè)腹股溝皮下注射的方法，建立人腎癌SCID鼠皮下移植瘤模型，并通過尾靜脈注射異體CD3AK細(xì)胞，對照組尾靜脈注射磷酸鹽緩沖液(phosphatebuffersolution，PBS)，劑量為0.2ml/只，觀察小鼠的生物學(xué)特征。SCID小鼠被隨機(jī)分為四組(n=8):A組（于荷瘤前尾靜脈注射異體CD3AK細(xì)

5、胞），B組（A組對照組:荷瘤前尾靜脈注射PBS）;C組（荷瘤后尾靜脈注射異體CD3AK細(xì)胞），D組（C組對照組:荷瘤后尾靜脈注射PBS）。隔日測量小鼠的體重、腫瘤體積以觀察小鼠體重及腫瘤生長變化;末次治療結(jié)束后24小時(shí)處死小鼠，無菌取脾臟、腫瘤組織用于后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　5.免疫組化法檢測CD3+細(xì)胞在小鼠腫瘤組織中的表達(dá)情況;計(jì)算脾臟指數(shù)（脾重/體重），觀察異體CD3AK細(xì)胞對腎腫瘤生長的抑制作用及其對小鼠免疫系統(tǒng)的作用。
　

6、　結(jié)果
　　1.將異體CD3AK細(xì)胞與人腎癌OS-RC-2細(xì)胞共同孵育12h，用CCK-8法檢測可以觀察到，隨著效應(yīng)細(xì)胞與靶細(xì)胞比值的增大，異體CD3AK細(xì)胞對OS-RC-2細(xì)胞的殺傷活性隨之增高。
　　2.A、C組小鼠與其對照組B、D組小鼠比較，A、C組小鼠的脾臟指數(shù)顯著增大（P＜0.05）;A組與C組比較，小鼠脾臟指數(shù)無明顯差異（P＞0.05）;
　　3.A、C組小鼠與其對照組B、D組小鼠比較，A、C組小鼠腫瘤重量

7、顯著減小，腫瘤生長緩慢(P＜0.05);A、C組與B、D組小鼠體重均增加，實(shí)驗(yàn)(A、C)組小鼠體重較其對照(B、D)組小鼠體重增加的少（P＜0.05），
　　4.A組小鼠與C組小鼠比較，A組小鼠腫瘤重量減小，腫瘤生長遲緩(P＜0.05)。
　　5.免疫組化方法示，CD3+細(xì)胞在C組小鼠腫瘤組織中有陽性表達(dá)，其余各組小鼠腫瘤組織未發(fā)現(xiàn)有陽性表達(dá)。
　　結(jié)論
　　1.異體CD3AK細(xì)胞對人腎癌OS-RC-2細(xì)胞株具有