穿心蓮提取物對(duì)小鼠腘窩淋巴結(jié)模型及P815細(xì)胞脫顆粒模型的作用研究.pdf

1、目的：穿心蓮注射液臨床過敏反應(yīng)多有發(fā)生，其安全問題亟需解決，利用小鼠直接法腘窩淋巴結(jié)(D-PLNA)試驗(yàn)及P815細(xì)胞脫顆粒模型對(duì)穿心蓮提取分離物進(jìn)行類過敏成分篩選，為穿心蓮制劑的質(zhì)量控制和安全有效性提供參考。
　　方法：(1)建立直接腘窩淋巴結(jié)模型：雌性BABL/c小鼠隨機(jī)分組，小鼠一側(cè)單次足趾部皮下給予受試物，每天測(cè)量足趾的厚度；6天后處死，摘取兩側(cè)淋巴結(jié)(PLN)，稱重，確定最佳取材時(shí)間，計(jì)算重量指數(shù)(Weights ind

2、ex，WI)，細(xì)胞指數(shù)(cells index，CI)，比較PLN組織病理的變化。
　　(2)臨床常見易發(fā)生過敏反應(yīng)的清熱類中藥注射液驗(yàn)證腘窩淋巴結(jié)模型的可行性
　　(3) BALB/c小鼠腘窩淋巴結(jié)試驗(yàn)及P815細(xì)胞脫顆粒試驗(yàn)用于穿心蓮提取物致敏性的篩選研究，采用小鼠D-PLNA模型，以淋巴結(jié)重量指數(shù)(WI)及細(xì)胞指數(shù)(CI)、淋巴結(jié)病理切片為指標(biāo)，對(duì)穿心蓮各級(jí)提取物進(jìn)行致敏性研究。采用P815肥大細(xì)胞模型,觀察穿心蓮各級(jí)

3、提取物對(duì)細(xì)胞脫顆粒百分率，組胺含量、氨己糖苷酶釋放度的影響，并進(jìn)一步評(píng)價(jià)穿心蓮提取物的致敏性，探討潛能的致敏成分。
　　結(jié)果：(1)成功建立小鼠腘窩淋巴結(jié)試驗(yàn)?zāi)Ｐ停?0μg氯化汞和0.75mg雙氯酚酸鈉可作為腘窩淋巴結(jié)試驗(yàn)中的陽性藥，試驗(yàn)結(jié)果分別為氯化汞WI=3.39±0.76，CI=6.82±1.28，雙氯酚酸鈉WI=2.33±0.35，CI=5.51±0.93。
　　(2)腘窩淋巴結(jié)試驗(yàn)中腫節(jié)風(fēng)(ZJFI)、清開靈(QK

4、LI)及穿心蓮(CXLI)注射液呈陽性結(jié)果，與臨床報(bào)道中中藥注射液的不良反應(yīng)結(jié)果大致一致。腘窩淋巴結(jié)試驗(yàn)具有可行性。
　　(3)D-PLNA實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：穿心蓮粗提物(AEE)組、乙酸乙酯部位(EAE)組及正丁醇部位(NBE)組的淋巴結(jié)重量均顯著增加，淋巴數(shù)目明顯增多，淋巴結(jié)重量指數(shù)WI>2,細(xì)胞指數(shù)CI>5；而水部位(AE)組淋巴結(jié)重量未見增加。三個(gè)穿心蓮內(nèi)酯單體組：NAD、AND、DDA均出現(xiàn)淋巴結(jié)重量增加，淋巴數(shù)目明顯增多，

5、WI>2，CI>5；細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示：穿心蓮粗提物、乙酸乙酯部位、正丁醇部位和三個(gè)穿心蓮內(nèi)酯單體(NAD、AND、DDA）均能可顯著提高P815細(xì)胞脫顆粒百分率、組胺含量及氨己糖苷酶釋放度。
　　結(jié)論：小鼠腘窩淋巴結(jié)試驗(yàn)最佳取材時(shí)間為給藥后第5天，D-PLNA用于藥物類過敏物質(zhì)的篩選具有可行性，穿心蓮提取物(AEE、TLA、EAE、NBE)及三個(gè)穿心蓮內(nèi)酯單體(NAD、AND、DDA)具有潛在的致敏性。穿心蓮內(nèi)酯是其抗炎、解熱、抗