vWF-A3區(qū)單抗SZ-123抑制人vWF與Ⅰ型、Ⅲ型和Ⅳ型膠原的結(jié)合及其抗血小板黏附功能的研究.pdf

1、研究背景：
　　近年來(lái)，隨著我國(guó)人口老齡化程度日益加重，血栓性疾病成為最常見(jiàn)的死亡病因之一，且其發(fā)病率仍在不斷上升。而血栓性疾病中，動(dòng)脈血栓引起的疾病因起病急，致殘率及病死率高而受到廣泛關(guān)注。動(dòng)脈血栓的治療主要是使用抗血小板藥物治療。臨床廣泛使用的第一代抗血小板藥物包括阿司匹林、噻氯吡啶和氯吡格雷等，阿司匹林能阻斷花生四烯酸途徑，噻氯吡啶和氯吡格雷能選擇性的抑制二磷酸腺苷（ADP）與其血小板受體結(jié)合，但這兩類藥物用于介入治療時(shí)均容

2、易發(fā)生“再梗”現(xiàn)象。第二代抗血小板藥物包括 Reopro和SZ-21，均為GPⅡb/Ⅲa拮抗劑，能阻斷血小板血栓形成的最終環(huán)節(jié),從而阻斷血小板聚集的最后通路。雖然它們作用效果較強(qiáng),但一些患者使用時(shí)會(huì)出現(xiàn)明顯的出血副作用。趙益明等之前報(bào)道了一株特異性針對(duì)vWF-A3區(qū)的單克隆抗體（monoclonal antibody，mAb）-SZ-123，為血管性血友病因子(von Willebrand factor，vWF) A3區(qū)鼠源性單克隆抗體

3、，主要針對(duì)病理性血栓形成的第一步—血小板黏附，通過(guò)抑制血小板黏附來(lái)阻斷病理性血栓的形成，但并不妨礙血小板聚集，從而減少出血的不良反應(yīng)。
　　目的：
　　(1)本研究旨在通過(guò)單抗SZ-123對(duì)vWF分別在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原上的結(jié)合抑制實(shí)驗(yàn)來(lái)研究單抗SZ-123對(duì)vWF在血管內(nèi)皮下各型膠原的抑制作用，進(jìn)一步闡明單抗SZ-123的抗血栓功能。
　　(2)通過(guò)用體外血管腔模型（Flow Chamber）來(lái)模擬體內(nèi)血管剪切力、溫度

4、等環(huán)境來(lái)研究單抗SZ-123的抗血小板黏附作用，也為將來(lái)開(kāi)發(fā)基于單抗SZ-123的抗栓藥物奠定基礎(chǔ)。
　　方法：
　?。?）首先用人胎盤(pán)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原包板，加入正常人混合血漿與單抗SZ-123同時(shí)孵育后，再加入辣根過(guò)氧化物酶（horseradish peroxidase，HRP）標(biāo)記的兔抗人vWF多克隆抗體孵育，四甲基聯(lián)苯胺（Tetramethylbenzidine，TMB）顯色后，用酶標(biāo)儀讀取吸光度值（OD）。
　

5、　（2）乙酸酸化的人胎盤(pán)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原分別包被在載玻片上，4℃過(guò)夜，經(jīng)生理鹽水洗滌后，用2% BSA-PBS封閉，備用。經(jīng)肝素抗凝（40U/ml）的人全血2管，一管加單抗SZ-123，另一管加單抗非抑制性抗體SZ-34為陰性對(duì)照，37℃孵育10min，在37℃，1000S-1剪切力的小室中灌注，將經(jīng)血小板黏附的載玻片表面用生理鹽水灌注2次后，在倒置顯微鏡下觀察黏附的血小板，并使用SlideBook軟件分析血小板黏附率。
　　結(jié)果

6、：
　?。?）vWF膠原結(jié)合抑制實(shí)驗(yàn)：結(jié)果表明 SZ-123呈劑量依賴性地抑制人血漿中vWF與Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原的結(jié)合反應(yīng)，對(duì)Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原的抑制率分別為95%、96%及41%。
　?。?）平板流動(dòng)小室內(nèi)血小板黏附實(shí)驗(yàn)（Flow Chamber）：結(jié)果表明，在高剪切力條件下、37℃環(huán)境中，SZ-123能夠抑制人血小板在Ⅰ、Ⅲ、Ⅳ型膠原上的黏附作用。
　　結(jié)論：
　　（1）單抗SZ-123能夠抑制人血小板在Ⅰ、Ⅲ、