血小板膠原受體GPIa-IIa和GPIV功能的實驗研究.pdf

1、血栓形成不僅是血栓栓塞性疾病(如冠心病、腦血管血栓病等)發(fā)病機制中重要的環(huán)節(jié)，而且也是多種其它類型疾病及常見診治過程中(如糖尿病、腎病綜合癥、外科手術(shù)等)必須面對的問題。血小板是生理性、病理性止血和血栓形成過程中的核心因素；膠原是血管內(nèi)皮下細胞外基質(zhì)中與止血和血栓形成密切相關(guān)的蛋白組分。血小板與膠原的相互作用是血栓形成過程最主要的啟動因素，兩者相互作用產(chǎn)生和釋放的多種生物活性物質(zhì)，更是在觸發(fā)和調(diào)控后續(xù)的一系列瀑布樣反應(yīng)中發(fā)揮著重要功能。

2、研究血小板與膠原相互作用的首要內(nèi)容是闡明血小板膠原受體的功能。被認作血小板膠原受體的分子都是血小板膜表面的糖蛋白，它們介導了血小板與膠原最初的粘附過程，引發(fā)了血小板活化，導致血小板聚集反應(yīng)、釋放反應(yīng)的發(fā)生。 在歷史上，曾有多種蛋白分子被提出作為血小板膠原受體的候選者，但大多被后續(xù)研究排除。最近十幾年，較受關(guān)注的候選者是血小板膜糖蛋白Ia／IIa(GPIa／工工a)、血小板膜糖蛋白工V(GPIV)、血小板膜糖蛋白VI(GPVI)等

3、。GPIa／IIa歸屬于整合素家族，被認為是介導血小板粘附到膠原的主要受體。GPIV是一種多功能分子，作為血小板膠原受體，介導血小板與膠原相互作用，是否是其主要功能之一尚有爭議。GPVI是免疫球蛋白超家族成員，初步研究顯示它可能在信號傳導中具有作用。 長期以來，在臨床實驗室中用于檢測血小板功能的手段不能令人滿意。一部分實驗，如玻璃柱粘附實驗等，由于靈敏度精確度差而被淘汰，另一部分實驗，如血栓素B2(TXBz)檢測、5一羥色胺(S

4、-HT)檢測等，由于涉及放射污染而鮮有開展。在前期工作基礎(chǔ)之上，我們應(yīng)用流式細胞術(shù)檢測血小板功能得到較好效果。檢測方法的靈敏度精確度均有顯著提高，且具有高效、快速、無污染等特點而有利于在臨床實驗室推廣應(yīng)用。 本文研究的內(nèi)容是選擇血小板膠原受體GPIa／IIa和GPIV作為切入點，首先探討了GPIa／IIa和GPIV在血小板與膠原相互作用過程中各自發(fā)揮的功能，主要包括這兩種分子對血小板三種功能層面(即粘附反應(yīng)、聚集反應(yīng)、釋放反應(yīng))

5、的具體影響；在此基礎(chǔ)上，進一步探討了將血小板膠原受體GPIV作為血栓形成傾向早期診斷新指標的可行性。通過以上研究過程，完善了止血和血栓形成機制的理論、改進了血小板功能檢測的實驗技術(shù)、建立了適合臨床使用的監(jiān)測血栓形成傾向的新指標。 研究方法如下： 1．在檢測血小板粘附膠原的功能中，我們利用流式細胞術(shù)在有／無抗6PIa／工工a抗體或抗GP工V抗體條件下，分別檢測血小板對膠原的粘附能力，進而觀察了粘附進程中不同時間點造成的粘附

6、能力差異。 2．在檢測由膠原誘導的血小板聚集功能中，我們利用三個不同指標(最大聚集率、聚集曲線斜率和聚集反應(yīng)延遲時間)來反映膠原受體GPIa／I工a和GP工V發(fā)揮的不同作用。 3．在檢測由膠原引發(fā)的血小板釋放功能時，我們利用流式細胞術(shù)檢測血小板釋放反應(yīng)標志物CD62P來反映血小板釋放功能在膠原受體受抑制前后的變化。 4．在建立血栓形成檢測新指標的實驗中，我們應(yīng)用凝血酶活化血小板后，膠原受體GPIV的上升率在正常個

7、體和患者之間的差異來反映活化血小板的存在。 實驗結(jié)果如下： L阻斷GPIa／IIa造成血小板粘附能力的顯著下降；阻斷GPIV盡管不能顯著減少血小板對膠原的粘附，但能在血小板粘附膠原的早期延緩粘附進程。 2．當用強誘導劑膠原誘導血小板聚集反應(yīng)時，阻斷GPIa／工工a能輕度降低血小板聚集反應(yīng)的最大聚集率，阻斷GPIV不能有效地降低血小板聚集反應(yīng)的最大聚集率；分別阻斷GPIa／IIa或GPIV都能顯著的延遲聚集反應(yīng)啟動

8、的時間并減緩聚集反應(yīng)發(fā)生的速率。 3．在由膠原引發(fā)的血小板釋放反應(yīng)中，膠原受體GPIa／IIa和GPIV是否受抑并不能影響CD62P的表達。 4．當用凝血酶活化血小板后，正常個體和有成血栓傾向疾病患者的血小板GPIV均有上升，但上升率的差異十分明顯。 基于上述實驗結(jié)果，我們得出如下結(jié)論： 1．血小板膠原受體GPIa／IIa是介導血小板粘附功能的重要分子，抑制GPIa／IIa能造成血小板粘附能力顯著降低；血

9、小板膠原受體GPIV在血小板粘附過程早期發(fā)揮輔助加速粘附進程的作用。 2．膠原受體GPIa／IIa和GPIV是膠原誘導血小板聚集反應(yīng)中的調(diào)控因素，抑制GPIa／IIa或GPIV主要造成聚集反應(yīng)啟動的延遲以及反應(yīng)進程的減緩。 3．膠原受體GPIa／IIa和GPIV在由膠原引發(fā)的血小板釋放顆粒內(nèi)容物反應(yīng)中作用微弱。 4．在有成血栓傾向的疾病中，患者血小板用凝血酶活化后，GPIV的變化率能反映體內(nèi)活化血小板的存在，可以