菊芋花瓣懸浮培養(yǎng)細(xì)胞的酚類物質(zhì)分析.pdf

1、菊芋(Helianthus tuberosus L.)是菊科向日葵屬多年生草本植物，原產(chǎn)于北美洲，現(xiàn)在在世界范圍內(nèi)廣泛種植。與傳統(tǒng)農(nóng)作物相比，菊芋具有生產(chǎn)投入低，生物量大，不易染病等一系列的優(yōu)點(diǎn)，成為當(dāng)前研究的熱點(diǎn)植物。菊芋葉片和塊莖次生代謝物質(zhì)的研究已經(jīng)不少，但是關(guān)于菊芋花瓣的研究還未見(jiàn)報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)以菊芋花瓣為研究材料，誘導(dǎo)了菊芋花瓣的愈傷組織、懸浮細(xì)胞，測(cè)定了花瓣愈傷組織、花瓣懸浮細(xì)胞、花瓣、花盤(pán)中的總酚、總黃酮含量，并使用FRAP

2、、DPPH、ABTS三種抗氧化方法，對(duì)提取物的體外抗氧化活性進(jìn)行了測(cè)定。
　　(1)以菊芋花瓣為外植體，建立了菊芋花瓣的懸浮培養(yǎng)體系?；ò暧鷤M織的誘導(dǎo)在MS培養(yǎng)基上進(jìn)行，篩選的最佳植物激素組合為NAA1mg/L+6-BA2mg/L，記錄愈傷組織繼代培養(yǎng)7周內(nèi)的細(xì)胞鮮重，發(fā)現(xiàn)愈傷組織在2-5周進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，在一周的穩(wěn)定期后進(jìn)入衰亡期。使用疏松透明的愈傷組織在相同的MS液體培養(yǎng)基中得到懸浮細(xì)胞，優(yōu)化了培養(yǎng)基的碳源和氮源，確定培養(yǎng)基

3、中蔗糖濃度為30g/L，外加氮源的組合為谷氨酸0.5mg/L+谷氨酰胺1mg/L。測(cè)定了花瓣懸浮細(xì)胞的生長(zhǎng)曲線，在第6-24天進(jìn)入對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，24-33天為穩(wěn)定期，33天后進(jìn)入衰亡期。
　　(2)使用60％的乙醇為提取劑，測(cè)定了不同生長(zhǎng)時(shí)期的菊芋花瓣懸浮細(xì)胞、愈傷組織總酚、總黃酮含量，發(fā)現(xiàn)穩(wěn)定期的花瓣懸浮細(xì)胞總酚、總黃酮含量最高，分別為15.02mgGAE/gDW和8.03mgQE/gDW。對(duì)菊芋花瓣和花盤(pán)中的總酚、總黃酮含量也進(jìn)

4、行了測(cè)定，其中花瓣中總酚、總黃酮含量分別為8.67mgGAE/gDW和5.39mgQE/gDW，低于懸浮細(xì)胞中的含量。以14種酚類物質(zhì)作為標(biāo)品，使用超效液相色譜法測(cè)定了這14種酚類物質(zhì)在植物材料中的含量，結(jié)果表明菊芋花瓣、花瓣愈傷組織和花瓣懸浮細(xì)胞中都檢測(cè)到了這14種酚類物質(zhì)，花盤(pán)中檢測(cè)到11種。其中7種酚類物質(zhì)（兒茶素、咖啡酸、水楊酸、3-羥基苯甲酸、阿魏酸、芥子酸、4-羥基香豆素）在懸浮細(xì)胞中含量最高，5種（沒(méi)食子酸、原兒茶酸、綠原

5、酸、表兒茶素、東莨菪內(nèi)脂）在花瓣愈傷組織中含量最高，4-羥基苯甲酸在花瓣中含量最高，槲皮素在花盤(pán)中含量最高。
　　(3)使用FRAP、DPPH、ABTS三種抗氧化方法對(duì)菊芋花瓣懸浮細(xì)胞等提取物的體外抗氧化活性進(jìn)行測(cè)定。結(jié)果表明，在菊芋花瓣愈傷組織和花瓣懸浮細(xì)胞生長(zhǎng)過(guò)程中，穩(wěn)定期的愈傷組織和懸浮細(xì)胞提取物在這3種方法的檢測(cè)下都具有最高的抗氧化活性。以菊芋花瓣、花盤(pán)為對(duì)照，菊芋花瓣懸浮細(xì)胞的FRAP抗氧化活性最高為9.07mgTE/g